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兔单抗亲和力和灵敏度更高
相对于鼠单抗(解离常数Kd在10-9-10-10M水平),兔单抗的亲和力可提高100-1000倍(Kd在10-10-10-12M水平)。实际使用时,兔单抗的工作浓度更低,灵敏度更高,因此产生的背景更低,大大降低了假阳性的发生。用作免疫组化等用途时,有时甚至可免去抗原修复的步骤。

兔单抗能识别更多表位
很多蛋白在人类和啮齿动物中同源性很高,这些保守表位在小鼠体内免疫原性很弱,不容易产生高质量抗体。而兔做为宿主,可以更好地识别这些表位,产生针对更多表位的抗体。当然,兔也适合生产针对鼠类蛋白的抗体。

多肽基本常识

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发布日期:2012-04-27 10:46 文章来源:丁香园
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关键词: 丁香园 丁香通 生物专题 义翘神州 多肽   点击次数:

一、保存

大多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前,冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,最好的方法是以小的工作样量存放。

对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解必不可少,因为这种多肽可易空气氧化,在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比,生命期有限。

二、溶解性

大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽,需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle来溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。

残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。

您需要特殊的多肽或任何技术帮助,请随时与我们联系。我们包你完全满意,对于我们不能适当合成的顺序,我们不收费。

三、多肽的保存和操作

包装1mg或更少的多肽按净重包装,声明的小瓶重不含相关抗离子和水。例如,氨基酸分析决定的肽含量是80%,在1mg样品中,那么瓶中毛重是1.25mg。

大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水,例如,25mg样品中肽百分比为90%,那么,实际肽量为25mg×90%=22.5mg

不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%, 而肽含量相关带电基团(如Arg, Lys )的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。

四、冻干肽的保存

所有产品应存于冰箱,最好为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。

五、肽溶液的保存

溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性pH(pH5-7),-20℃保存的,为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。一份样品融冻后未用完,应扔掉,细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦,为克服此,肽应溶于无菌水,或肽溶液用0.2μ M滤膜过滤。

六、多肽的重建和操作

多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时,要注意使初始浓度比要求浓度大,如果多肽仅有限溶解性,这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。

如果多肽在水中的溶解性有限,有几种选择可帮助溶解:

1、对碱性肽用稀乙酸(含Arg,Lys,His)

2、酸性肽用稀氨水(含Asp,Glu)

3、对极疏水的肽用10%有机修饰物(Acetonitnile,Methanol)

4、极不溶的肽用DM50或DMF

5、guanicline hydrochloride或脲的浓溶液也很有用,与上述方法合用,声处理也是溶解多肽的有效手段。

七、多肽的包装

目录中所有多肽除特别说明外,纯度为95~98%。包装为小瓶冻干粉。除特别注明外,多肽净重包装,例如,1mg瓶的β-amyloid 1-40精确含1mg的多肽。多肽净重由氨基酸分析得到的肽含量计算。例如,一个多肽样品毛重5mg,氨基酸含量85%,多肽净重为5mg×0.85=4.25mg。请注意,多肽含量不是多肽纯度,与抗离子象乙酸盐和溶剂,特别是水结合量合成多肽的本身特性。多肽纯度可能达100%,但合成品中多肽含量由氨基酸组成,硫水性,和多肽对溶剂和离子的暴露决定,特别是在纯化过程中,无论多肽如何纯,冻干粉多肽含量一般为70-85%。剩余15-30%由其它基本非肽成份构成。

八、多肽应用和保存

多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外,这点都会发生,在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用声处理。溶解仍有问题,加少量稀乙酸(10%)或氨水,会便于溶解。

要长期保存多肽,最好冷冻干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。多肽易受细菌降解,应用无菌纯化水溶解。

含有Met,Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化,寿命有限。应溶于无氧溶剂,为防止重复冻融的破坏,建议溶解过量的肽的便实验,其余多肽以固体形成保存。

编辑: wangminchao

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