丁香园 | 丁香通 | 人才 | 会议 | 药学 | 博客  
 点击次数:

使用荧光素酶检测RNAi效果

转载请注明来自丁香园
发布日期:2010-04-07 16:34 文章来源:北京原平皓生物技术有限公司
分享到: 收藏夹 新浪微博 腾讯微博 开心网 豆瓣社区 人人网
关键词: 荧光素酶 检测RNAi RNA干涉   点击次数:

原理:

RNAi (RNA interference) 即RNA干涉,是由双链RNA(dsRNA)介导的、由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。在RNAi研究中,我们可以人工合成特定的dsRNA,对目的基因进行干涉。但设计的dsRNA不同,实际干涉效果差异很大。所以有时候就需要筛选dsRNA片断。

PsiCHECK载体将RNAi与荧光素酶发光相偶联:当RNAi有效时,转录的荧光素酶RNA将被降解,无发光反应;当RNAi无效时,转录的荧光素酶RNA将翻译为荧光素酶,并参与发光反应。通过检测发光即可反应RNAi的效果。

以PsiCHECK-2载体为例:将RNAi的靶片段插入到hRlu片段下游的多克隆位点中,然后将构建好的载体与特定的dsRNA片段或能转录dsRNA的载体共转染进细胞;转然后,细胞培养一定时间,裂解细胞使用ModulusTM多功能检测仪(http://www.yph-bio.com/equip/modulus/modulus.asp)检测荧光素酶的表达情况。

反应:


RNAi反应示意图之一

 


RNAi反应示意图之二

编辑: yishuitan 作者:丁香园通讯员

以下网友留言只代表网友个人观点,不代表网站观点