P-糖蛋白（p-gp）发光检测
原理：
P-糖蛋白（P-gp），也被称为多耐药基因1（MDR1）和ABCB1，是一种170kDa的完整的质膜蛋白。P-糖蛋白是一个ATP依赖性转运蛋白，能将许多结构不同的化合物逆向转运出细胞。Pgp在人体正常组织肝脏、肾脏、肠道、胎盘、血脑屏障以及淋巴细胞系和心脏内小动脉、毛细血管等部位都有分布。P-gp在人体正常组织内的分布以及对药物的逆向转运功能使得P-gp在药物的吸收、分布、代谢和清除方面具有重要意义。
将P-gp的酶促反应与荧光素酶的发光反应相偶联，可以通过发光检测来确定P-gp的活性，从而筛选出影响P-gp活性的药物或化合物。
反应：
试验方法：
1、试剂准备
a) 按照说明书，制备ATP检测试剂
b) 按照说明书，制备MgATP
c) 按照说明书，制备2.5×Pgp-Glo™ Assay Buffer
d) 按照说明书，使用Pgp-Glo™ Assay Buffer制备Pgp膜
2、检测发光
a) 每孔中加入20ul 的Pgp-Glo™ Assay Buffer
b) 再加入20ul Pgp膜，37℃孵育5min
c) 然后加入10μl 25mM 的MgATP ，这样每孔中含有5mM的ATP
d) 混匀后，在37℃下孵育40min
e) 孵育后，加入50ul荧光素酶检测液，室温下孵育20min
f) 然后使用Modulus发光检测仪检测发光
编辑: helen 作者:李鹏飞
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