转基因拟南芥精原细胞的分选
研究背景
拟南芥（Arabidopsis thaliana），又名鼠耳芥、阿拉伯芥、阿拉伯草。这种小小的有花植物，是在植物科学，包括遗传学和植物发育研究中著名的模式生物。
花粉作为植物的雄配子体，在有性生殖中发挥着重要作用，花粉发育及花粉管的萌发和生长是植物有性生殖过程中的重要事件，也是研究植物细胞极性生长、分化以及信号转导的重要体系。在植物的遗传及发育研究中，对于雄性配子整个基因组水平的研究可以更加深入的了解精子成熟和受精发生的机制和条件，利用基因芯片技术在基因组水平上进行转录组学分析。与基因组不同的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不完全相同的。通过测序技术揭示造成差异的情况。但是在以往的研究中缺乏对于整个基因组的研究，而使用分选型流式细胞仪可以成功分离精元细胞，直接得到核酸序列信息，通过比较转录组或基因表达谱的研究以揭示生物学现象或疾病发生的分子机制。
在分选型流式的应用中，我们用其分选转基因拟南芥花粉中的精原细胞，并对精原细胞进行RNA提取及序列测定，用来研究基因的改变对于花粉生活力、萌发力及可育性的影响。流式细胞仪作为下游实验样本获取的手段已经越来越多的运用到了生命科学研究领域，并且逐渐的发展为与多种学科密切交叉的特异性样本预获取方法。
实验案例
图1 使用BD FACSAria II成功分选出花粉颗粒中植物精原细胞，含量为1%
结果讨论
在实验中使用BD FACSAria II成功分选出花粉颗粒中植物精原细胞，含量为1%。分选后的精原细胞在显微镜下观察形态良好，活性高。分选后的精原细胞将进行总RNA的提取，用于下游基因表达谱及特异性基因表达的研究。
在实验的进行过程中分选样本的制备和整个分选过程都是至关重要的。在样本的制备过程中，为了拿到完整的精元细胞，需要对花粉进行洗脱，然后通过匀浆裂解，要控制理解的力度和时间，保证精元细胞的完整性和活性。在分选的过程中需要注意的是调节好鞘液的渗透压，选择合适的喷嘴和鞘液压力，保证分选后的细胞不会发生破碎，以免RNA释放出来。
相关文献
简介：文章介绍了在植物领域的研究中原生质体的分选，使用Aria分选后得到的细胞分离出高质量的RNA，用于后续基因表达谱及特异基因表达的研究。与分子生物学相结合做转录组学分析。
简介：文章中提到并肯定了流式分选技术的应用作为一种更有效的样本获取方式，对于更好的了解分子的作用方式及对转录组学研究带来的便利。
编辑: gaowei2010
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