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转基因小鼠精元细胞分选

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发布日期:2012-10-30 16:58 文章来源:丁香园
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关键词: 分子生物 流式技术 技术专题 碧迪 丁香园 丁香通   点击次数:


研究背景

转基因技术是通过遗传工程的手段对动物基因组的结构或组成进行人为的修饰或改造,并通过动物育种技术使得这些经修饰改造后的基因在世代间得以传递和表达。利用这一技术可做特定基因的功能性研究,对于遗传结构改变所引起的表征性状改变或病理研究等都有非常重要的意义。

除此之外,流式分选细胞仪作为一种特殊样本获取和制备的有效途径,对于生殖干细胞的获取以及后续研究起到了事半功倍的作用。GSC的重要性毋庸置疑,其分化的精子和卵子将遗传信息传递给下一代,在减数分裂过程中又出现了遗传差异,近年来对GSC的研究获得很大进展,如非生殖系成体干细胞体外分化为生殖细胞,成体性腺外也存在GSC以及睾丸内多潜能GSC的提取等,这些新发现也为研究配子发生过程和影响因素提供了新途径,甚至对于遗传学、发育繁殖等学科起到了极大的影响。GSC的多潜能性使之可代替ESC进行组织修复,从而具有广阔的应用前景。2012年在nature medicine上刊出文章,使用BD Aria流式细胞仪分离小鼠雌性生殖干细胞,这些细胞能够在实验室中生长并最终形成不成熟的卵母细胞。这些潜在的卵干细胞有助于科学家开发出新的途径,从而帮助恢复那些经历了癌症治疗或是早绝经的女性的生育能力。

实验案例

本实验使用BD FACSAria III对于转RFP基因雄性小鼠性腺中精原细胞进行鉴定及分选。通过对插入特定基因的精原细胞的纯化富集,并结合显微注射的遗传育种技术,进行下游遗传学的研究。现在,特异性样本的获取是流式细胞分选的另一个越来越为普遍的应用,流式细胞分选法以其快速、有效、可靠已成为获得高纯度特异性样本最为有效可行的方法。

 


结果讨论

用BD FACSAria III成功分出RFP转基因小鼠的RFP+细胞(精原细胞)。分选收集RFP+细胞,约1x105个,种植到60孔板中,分选后细胞培养当天可见细胞贴壁生长,活性好。收集分选后细胞进行显微注射,注射入雌鼠卵细胞中,完成受精过程并发育成胚胎,幼鼠做活体成像可检测到示踪RFP荧光。

相关文献

简介:文章中利用BD Aria进行单细胞分选,在96孔板中长成克隆,同时使用荧光显微镜进行了活性的监控,随后使用长出的克隆进行活体移植来研究哺乳动物精元干细胞随机自我更新和分化能力。充分说明了BD FACSAria 细胞分选的高活性。


简介:文章中利用BD Aria流式细胞仪细胞分选技术从育龄期人类女性卵巢中分选出了人类的雌性生殖干细胞,这种细胞已经在体外稳定传代了18个月(至发稿时),并且经过异体移植实验表明这种雌性生殖细胞可以在卵巢皮质部经过有丝分裂产生卵母细胞。


 

编辑: gaowei2010

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