使用发光检测试剂盒aCella™ -TOX检测细胞毒性
1. 应用说明
Cell Technology公司的aCella-TOX试剂盒是通过检测哺乳动物细胞或者细菌细胞的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）活性来定量细胞毒性，aCella-TOX试剂盒的检测量最低可达5个细胞/100ul培养液。
在糖酵解过程中GAPDH催化3-磷酸甘油醛(GAP)转化成1,3-磷酸甘油酸酯(1,3-BPG)的氧化磷酸化反应，1,3-BPG在磷酸甘油酸酯激酶(PGK)作用下脱磷酸产生ATP，ATP可以通过萤光素酶/萤光素生物化学反应发光检测而定量。Modulus微孔板多功能光度计采用独特的光检系统使得在aCella-TOX试剂盒分析中能达到最高灵敏度和最宽线性范围，检测使用aCella-TOX试剂盒。
图1：将不同浓度的Jurkat细胞铺板，每孔加入NP-40细胞毒性分析试剂，采用aCella-TOX来检测G3PDH酶活性，图中数据点RLU为三次测量平均值。
2. 所需器材
Veritas微孔板发光检测仪（http://www.yph-bio.com/equip/GloMax/Veritas.asp）(P/N 9100-000)
白色不透明96孔板(E&K Scientific EK-25075)
Cell Technology， aCella-TOX检测试剂盒。
3. 实验方案
3.1 试剂制备
小瓶A：酶检测试剂（4×）
试剂瓶A：酶检测稀释液A
小瓶B：检测试剂（50×），含萤光素酶/萤光素底物
试剂瓶B：检测试剂稀释液B（5.5×）
小瓶C：三磷酸甘油醛G3P
小瓶D：5×裂解试剂
3.1.1 使用前，置于冰上解冻试剂A（4× 浓缩液），配制2×工作液，按照1:2的比例将4×的酶检测稀释液A和酶检测试剂A稀释。3.1.2 分装后，在至少-70°C条件下冻存剩余小瓶试剂A
3.1.3 接下来，快速解冻小瓶试剂C。每毫升2×酶检测试剂中加入3.5ul的小瓶试剂C，配制试剂要足够当天实验所需。在低于-70°C条件下，剩余的2×酶检测试剂两周内活性不会损失。
3.1.4 解冻试剂瓶B(5.5X 浓缩液)，使用前用试剂级去离子水按1:5.5倍稀释。
3.1.5 分装剩余试剂保存在-20°C到-70°C条件下。
3.1.6 使用前，置于冰上解冻小瓶B中试剂(检测试剂 50X 浓缩液)。
3.1.7 分装并-70°C冻存剩余试剂。
3.1.8向样品中加入检测试剂前，用检测试剂稀释液B按1:50倍比例稀释。
3.1.9 向每个样品中各加50ul
注：混合试剂避光保存。
3.1.10 使用前用去离子水按1:5倍比例稀释小瓶 D中试剂，稀释试剂可室温保存。
注：使用其他裂解试剂会干扰测量信号，TritonX 100会严重抑制发光信号。
注：所有试剂避免反复冻溶。
编辑: yishuitan 作者:丁香园通讯员
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