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HRM检测技术

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发布日期：2012-09-18 15:23 文章来源：丁香园
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关键词： 甲基化 技术专题 欧易生物 丁香通 丁香园 　 点击次数：


高分辨率熔解（High Resolution Melt,HRM）是一种最新的在表观遗传学中检测 CpG 位点的一种新技术，主要是根据DNA序列的长度、GC含量、碱基互补性差异和特定饱和染料可以插入DNA双链中的特性，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，其分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分。

欧易生物利用罗氏 LightCycler 480平台，对DNA甲基化水平进行HRM检测。HRM技术特别适用于样本量多、检测位点较少的甲基化分析，是不同于基因芯片检测方法（检测位点多，样本少）的高通量方法。同时，也是基因芯片筛选后的多个基因在更多标本中验证的最佳方法。HRM方法操作简单、灵敏高、重复性高、成本低、不受检测位点的局限等优势，将对于遗传学、肿瘤学等方面的研究和临床应用提供更大的帮助。

HRM技术优势：

    简单：无需序列特异性探针，不受碱基位点局限，同时检出已知或未知突变、SNP和甲基化位点；闭管操作，避免交叉污染。

    高效：最低检测0.1%的突变或异常甲基化。

    快速：1次同时检测不多于384个样本，在60-90分钟内完成检测。

    价廉：简化操作步骤、降低人工和试剂成本，费用远少于测序等检测方法。

HRM服务内容：

1.    对客户提供样本进行DNA的分离、纯化

2.    根据客户提供相关信息进行引物设计、方案设计，引物设计软件为Methyl Primer Express v1.0，扩增片段长度约为100bp。

3.    亚硫酸氢钠处理DNA，并对标准品和样本进行甲基化PCR扩增

4.    运用HRM技术获得特异熔解曲线

5.    结果分析

结果示例：


 

 


图A:标准熔解曲线；图B：标准差异曲线；图C：样本熔解曲线；图D：样本差异曲线

从图C和图D中可以判断样本A的甲基化水平接近25%，样本B的甲基化水平接近50%。

案例分析：

MS-HRM技术检测CD14启动子区域甲基化水平差异

表观遗传研究表明哮喘和过敏症的发生可能与宫内环境相关。研究者分析了94例胚胎样本的免疫受体基因CD14的表达水平和启动子区域甲基化水平，通过采用MS-HRM技术对其中36例样本进行半定量的甲基化分析，发现来源于生活在农场的母亲的胚胎的CD14启动子区域甲基化程度明显低于生活在其他环境中。



利用MS-HRM对CD14-1和CD14-2启动子区域甲基化状况进行研究的熔解曲线，其中图A和图B 是标准曲线

原文：DNA methylation levels within the CD14 promoter region are lower in placentas of mothers living on a farm. Allergy. 2012 Jul.

编辑: gaowei2010

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