CRISPR/Cas9 基因编辑技术学习班

CRISPR/Cas9 技术培训背景介绍：
CRISPR/Cas9  是细菌和古细菌在长期选择压力中形成的一种适应性免疫防御，可用来有效抵御病毒及外源 DNA 的入侵。CRISPR 的 Type II 已经被广泛用于基因工程，它包含 Cas9，crRNA 和 tracrRNA，其中 crRNA 含有能够识别 20bp 的靶向互补序列。Cas9，crRNA 和 tracrRNA 组成复合体，识别并结合 crRNA 互补的序列，然后解开 DNA 双链，Cas9 中的 HNH 活性位点剪切 crRNA 的互补 DNA 链，RuvC 活性位点剪切非互补链，最终导致 DNA 的双链断裂（DSB），进而实现基因的敲除和插入。

目前，CRISPR/Cas9 系统已经广泛用于对哺乳动物细胞，细菌，斑马鱼，小鼠，猪，猴的基因编辑。本学习班将详细讲解 CRISPR/Cas9 基因编辑工具原理，操作流程，理论结合实践，将让大家详细了解到具体如何利用 CRISPR/Cas9 技术构建基因修饰动物等。学习班将为相关科研工作人员和兴趣爱好者提供了很好的培训资源。

讲师介绍：这次学习班我们邀请了两位在基因编辑领域具有丰富实操经验的教授作为主讲人，通过三天的系统学习，能让您熟悉并掌握基因编辑技术的核心知识点与详细操作技巧。    第二天与第三天主讲人：李博士
德国慕尼黑工业大学海归博士，具有多年丰富的基因编辑实操经验参与德意志研究基金委项目 (DFG) 用于人类癌症研究的转基因克隆猪模型
(SCHN971/3-1)
Ø博士导师为原英国 Roslin Institute 克隆羊「多莉」团队的 Prof. Dr. Angelika
chnieke
Ø成功构建世界上第一头 ROSA26 双荧光猪模型，极具有生物医学价值 (已发表)。随后，成功构建 Kras 点突变基因修饰克隆猪模型，该模型为构建胰腺癌大动物模型提供了有力工具，为胰腺癌相关靶向药物开发，寻找新的胰腺癌治疗手段等提供了新的动物模型。
第三天主讲人：王永明教授研究员，博士生导师，2015 年国家青年千人获得者。1997-2001 年就读兰州大学生命科学学院并获得学士学位，2001-2004 年就读东北师范大学生命科学学院并获得硕士学位，2005-2010 年在德国马克斯-德尔布吕克分子医学中心（MDC）做博士生研究，并获得柏林自由大学博士学位。2010-2013 年在斯坦福大学医学院从事博士后研究。2013 年至今历任复旦大学生命科学学院青年研究员、研究员。  王永明博士于 2010 年在斯坦福大学医学院做博士后研究，较早的开展了对基因编辑技术的研究和应用，主要贡献有 1）首次把基因编辑技术用到了心血管领域，论文发表在 Circulation Research 上，被评为 2012 年度心脏领域最好的论文；2）首次用基因编辑技术制作了长 QT 综合症干细胞模型；3）发明了附着体 CRISPR/Cas9 技术，可以高效的敲除基因；4）发明了高通量测试 gRNA 效率的方法，筛选了 5 万多个 gRNA 的活性。

日程安排 
第一天周六上午 9：00-12：00
1.  基因编辑技术原理
2.  基因编辑技术应用
3.  三种基因编辑技术（ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9）介绍
4.  其他类型的 CRISPR 核酸酶介绍（Cpf1, SaCas9, 人工改造后的 Cas9）
5. CRISPR/Cas9 常用载体介绍
6.  基因序列分析（请自带可无线上网之笔记本电脑或手机，在线设计演练）
7.  设计 gRNA 的网站（在线设计演练）
8.  构建 gRNA 表达载体（设计演练）
9. PCR 引物设计（设计演练）
第一天周六下午 13：00-18：00
10.  基因敲除的方法（设计演练）
11.  基因敲入的方法（设计演练）
12.  检测脱靶的方法
13.  提高 CRISPR/Cas9 特异性的方法
14. CRISPR/Cas9 导入细胞的方法
第二天  周日  上午 9:00-12:00
1, px330 质粒系统介绍
2，sgRNA oligos 模板退火方案
3，退火 gRNA 与线性化 CRISPR/Cas9 载体连接详细方案
4，连接产物转化到大肠杆菌（DH5α）
5，转化产物涂板培养
6，鉴定插入 oligo 后的基因编辑质粒 ps330 质粒体系
7，构建同时敲除两个基因的质粒体系
8，如何构建 CRISPR/Cpf1 质粒体系
9，CRISPR/Cpf1 质粒体系鉴定
第二天周日下午 13:00-18:00
1，Cas9 的多功能系统（如 Cut, Nick, Activate, dCas9-FokI）的详细介绍
2，利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰小鼠方法介绍和实际操作方案
3，CRISPR/Cas9 相关基因修饰小鼠模型介绍和操作方案
4，利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰大动物（猪、猴）方法介绍和实际操作方案
5，CRISPR/Cas9 与基因修饰大动物模型介绍和详细操作方案

专题：利用 CRISPR/Cas9 技术编辑动物细胞系
1， CRISPR/Cas9 质粒细胞转染方法
2，  阳性细胞克隆筛选
3，  基因编辑细胞系的建立
4，  基因修饰情况分析方法

第三天  周一   上午 9:00-12:00
1， CRISPR/Cas9 重组子细菌克隆挑取，扩大化培养，鉴定
2，  基因修饰基因组 DNA 模板（转染 CRISPR/Cas9 到动物细胞后提取 DNA）制备
3，  目的靶基因的基因组 DNA 片段的 PCR 扩增，电泳检测 PCR 产物
4， PCR 产物退火变性，T7E1 酶切，电泳鉴定基因修饰情况
专题：利用 CRISPR/Cas9 技术构建基因敲除或敲入小鼠
1，基因编辑工具 CRISPR/Cas9 基本背景介绍
2，sgRNA 设计及其功能验证
3，小鼠受精卵分离和培养
4，CRISPR/Cas9 系统显微注射到小鼠受精卵
5，受精卵显微注射后回输到代孕母鼠体内
6，PCR 和 T7E1 分析和鉴定基因敲除小鼠（Founder）
7，基因敲除小鼠基因敲除情况分析
8，CRISPR/Cas9 构建基因敲除小鼠详细实验流程归纳和总结

第三天  周一  下午 13:00-15:00
专题：实验结果的点评与讨论
1， CRISPR/Cas9 载体构建讨论
2，  目的靶基因的基因组 DNA 片段的 PCR 扩增，电泳检测 PCR 产物结果讨论
3， PCR 产物 T7E1 酶切，电泳鉴定基因修饰情况结果讨论
4， Sanger 测序鉴定基因编辑结果
1） CRISPR/Cas9 质粒阳性转化子测序结果确认
2） Sanger 测序阅读基因编辑情况
3）  如何从测序色谱图中阅读靶向突变等位基因型
专题：利用 CRISPR/Cas9 技术构建基因修饰大型动物（猪）
1，  利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰大型动物（猪）流程
2，  基因修饰大型动物优势
3，  利用 CRISPR/Cas9 构建基因修饰大动物（猪）模型介绍
专题：CRISPR/Cas9 脱靶问题分析
1，  脱靶产生的原因
2，  脱靶检测方法
3，  降低脱靶问题的方法
专题：基因编辑工具拓展
1， CRISPR/Cas9 技术的发展与应用
2，  新基因编辑工具 Cpf1，C2C2 的用法与比较
3，  基因编辑工具的伦理问题
4，  基因编辑工具的应用拓展。
5，  根据学员的研究内容，详细答疑如何使用基因编辑工具。

上海班
培训时间：2018 年 6 月 23 日-6 月 25、8 月 4-6 日、9 月 1-3 日、12 月 8-10 日
培训地点： 浦东新区中兴和泰酒店上海市浦东新区科苑路 866 号

相关介绍注意点：每人需要带笔记本电脑！ 
特别说明：如果需要我们的上外网路由神器，用于上 google 学术等国外网站，请自己在邀请函上加 900 元，我们会在你们的会务费发票上加 900 元，给您开发票，如果不需要神器，就是按照我们邀请函上的价格，神器可以至少保证用 2 年以后。

【收费标准】
注册费：3300 元每位（注册费包含电子版教材、午餐，欢迎晚宴费用，住宿费自理。）
优惠政策：1. 提前 20 天确认报名及转账的优惠 100 元 2. 三人组团报名，每人可优惠 3100 元 3.   四人组团报名，每人收费 3000 元，4.   五人组团报名缴费，额外带一人免费注册！ 5.   参加免注册费复听的老学员，需缴纳 500 元餐费（两顿午餐，一顿晚餐，可开会务费发票，介绍新学员来的，可免除餐费）   可以开正规会务发票，纸质邀请函（盖红章）。

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推荐下面三个基因编辑用的质粒可以选择订购，每个质粒 800 元，3 个一起订购按照 600 元一个（发票单独开）       
1，ps330A-cas9-sgRNA（可插入任意 20bp 靶点序列）     
2，ps330S-2-cas9-sgRNA（可用于同时敲除 2 个靶点的载体）   
3，p-p53-cas9-GFP（可用于小鼠 p53 基因敲除的载体）

咨询电话：021-50327163
金老师：18917745941
王老师：13818765978

编辑： 会议君