双分子荧光互补技术（BIFC）
双分子荧光互补技术BiFC（Bimolecular Fluorescence Complementation）
是将荧光报告蛋白按照规则分成没有荧光的两段，分别与诱饵蛋白和捕获蛋白融合，只有在诱饵蛋白和捕获蛋白发生相互作用的情况下，两段不完整的荧光报告蛋白才会形成完整的报告蛋白，发出荧光。活细胞收集后，在流式细胞仪中的检测是实时进行的，只要细胞中有荧光产生就会被捕捉到信号，因此，不论是亲和力较弱的结合还是暂时性的结合都不会被遗漏。
双分子荧光互补技术原理示意图
(a) 诱饵和捕获蛋白分别携带CYFP和NYFP两段YFP荧光蛋白片段(b) 诱饵和捕获蛋白结合同时CYFP与NYFP形成YFP (c) 形成的YFP发出荧光
（1）BiFC检测的特点：
活细胞分析；
可以用于研究2种或2种以上的启动子调控之下的蛋白质相互作用；
具有很高的信噪比，弱蛋白相互作用也可以检测到（>7nm）。
（2）可用于BiFC的荧光蛋白：
GFP、BFP、CFP、YFP，生理条件可用的黄色的Venus和citrine，青色的cerulean；
红色系统：mRFP2Q66T、mCherry；
Venus（EYFP的变体）是目前用于 BiFC分析最多的荧光蛋白，因为其荧光强且背景敏感度降低，是BiFC分析理想的荧光蛋白。
常见的用于双分子荧光互补技术的荧光蛋白
BiFC研究复合体中亚基间的相互作用
摘自：Detection and Characterization of Influenza A Virus PA-PB2 Interaction through a Bimolecular Fluorescence Complementation Assay
Joseph N. Hemerka, Dan Wang,et al. JOURNAL OF VIROLOGY, Apr. 2009, p. 3944-3955
图释：流式细胞仪 FACSCalibur检测流感病毒复合体中亚基PA-PB2间的相互作用。（B）流式检测同时转入PA/PB2的COS-1细胞及单转入PA-VC的细胞的Venus荧光信号，显示转入24小时后的荧光强度。（C）萤火虫荧光蛋白酶显示，转入单或双质粒的细胞，萤火虫荧光蛋白酶活性一致。
BiFC研究信号传导通路中蛋白质间的相互作用
摘自：Characterization of the latent membrane protein 1 signaling complex of Epstein-Barr virus in the membrane of mammalian cells with bimolecular fluorescence complementation
Pooja Talaty, Amanda Emery, et al. Virology Journal 2011, 8:414
图释：流式细胞仪FACSLSRII检测BiFC信号。LMP1-NYFP和LMP1-NYFP突变体分别与CYFP-TRAF2、CYFP-TRAF3转入细胞内，检测其相互作用。曲线蓝色部分为出现YFP的荧光阳性表达，表明LMP1与CYFP、CYFP均存在相互作用。
编辑: gaowei2010
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