表面展示技术与流式
表面展示（surface display）是一种新的基因操作技术，使表达的多肽以融合蛋白形式展现在核糖体、病毒或细胞表面，保持相对独立的空间结构和生物活性。借以研究多肽的性质、相互识别和作用，筛选特定功能的多肽结构，实现蛋白质的固定化和定向进化。噬菌体表面展示技术和酵母表面展示技术是应用最广泛的技术，流式细胞仪在各种展示技术中的高效准确的筛选应用也越来越被关注和使用。
噬菌体展示技术与流式技术
噬菌体展示技术（Phage Display Techniques ,PDT）是一种基因表达产物和亲和选择相结合的技术，他以改构的噬菌体为载体，把待选基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，进而通过亲和富集法表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。
噬菌体展示技术应用于抗原抗体库的建立、药物设计、疫苗研究、病原检测、基因治疗、抗原表位研究及细胞信号转导研究等。
噬菌体展示技术的步骤
(1)不同基因分别被插入噬菌体基因组中
(2)分离纯化的噬菌体只是展示一个蛋白，多肽或者抗体。
(3)收集所有的噬菌体就构成一个文库将噬菌体文库与靶蛋白相互作用，淘洗(panning)能与靶蛋白相互作用的噬菌体。
流式细胞技术在噬菌体展示技术中淘洗(panning)步骤中的应用
噬菌体展示文库中挑选克隆，一般需要数轮的淘洗和扩增。（一）初次淘洗，以确定目标；（二）再进行第二次特征识别，找出与最佳亲和力和特异性的克隆。（三）反复扩增淘洗。
普通淘洗流程
由于功能性筛选时干扰因素过多，步骤繁琐，筛选的最后经常需要通过测序识别出高亲和力的克隆，但测序只能通过识别克隆中的共同序列确定，但这样方法不是最佳方案，因为它可能会受到各种因素的干扰例如噬菌体生长率，非特异性结合和其他的选择压力而导致偏向选择。
流式淘洗流程
原理：微球连接上噬菌体的特异抗体，捕获文库中的噬菌体，再用荧光标记抗体与噬菌体表达蛋白特异性结合，筛选出结合的噬菌体。不同的荧光强度的微球来标记不同的展示文库。
总结：流式细胞仪运用光学编码微球阵列技术和抗体识别技术一起完成淘洗(panning)中结合活性的有效筛选和高亲和力评价，特点是高通量、节省样本、步骤简单准确。
流式技术高通量筛选噬菌体展示库中的克隆
摘自：High-Throughput Screening and Characterization of Clones Selected from Phage Display Libraries
Loretta Yang, John P. Nolan Cytometry Part A _ 71A: 625_631, 2007
图释：多方向检测CTB结合噬菌体展示。 （A）荧光素和FSC的双参数散点图VS荧光素荧光20 Nm和CTB-FITC结合编码微球的双参数散点图。 （B）的荧光直方图从阴性微球背景信号（空直方图）和与20NmCTB-FITC（充满直方图）共同孵育的信号微球。 （C）十种不同荧光的微球和CTB-FITC（黑条）以及未标记CTB（2uM，白条）共同孵育后出现的不同的噬菌体展示。噬菌体展示的背景微球需扣除。
酵母双杂交技术与流式技术
酵母表面展示技术原理
酵母细胞表面展示技术是一种真核蛋白表达系统。其基本原理是将外源靶蛋白基因与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞，融合蛋白诱导表达后，信号肽引导融合蛋白向细胞外分泌。由于融合蛋白含有锚定酵母细胞壁的结构，可将融合蛋白锚定在酵母细胞壁中，从而将外源蛋白分子固定化表达在酵母细胞表面。
酵母表面展示文库筛选方法
1）传统的结合－洗脱－扩增筛选方法；
2） 流式细胞仪进行筛选，运用FACS技术能大大提高阳性克隆富集比率和灵敏率。
高效的单链抗体动力学筛选技术与快速的动力学测定方法
摘自：Isolating and engineering human antibodies using yeast surface display
Ginger Chao, Wai L Lau NATURE PROTOCOLS | VOL.1 NO.2 | 2006
实验原理：向大库容单链抗体酵母展示库中，加入少量（红色）荧光标记的靶抗原蛋白，过量的带有（绿色）荧光的单链抗体会竞争性的与靶抗原进行结合，亲和力较高的组合会显示双荧光，被流式细胞分选仪分选出来。通过检测事先设定好的不同抗原/抗体数量比样本的荧光强度值，根据解离常数公式计算解离常数。
图释：本方法中，应用流式细胞分选技术对单链抗体进行动力学筛选是方法的关键环节。图所示是研究者第一次动力学筛选的过程。研究者使用未标记的酵母细胞作为阴性对照，使用Alexa Flour 488单阳性酵母细胞调节与PE共同标记的补偿值，并将Alexa Flour 488和PE双阳性细胞作为第一次分选的目标群。同时利用与单链抗体上的c-myc相互结合的Alexa Flour 488荧光强度检测酵母展示的效率。为接下来的次级库富集和进一步筛选奠定了坚实的基础。
编辑: gaowei2010
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