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指数富集的配体系统进化技术(SELEX)与流式

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发布日期:2012-10-10 15:01 文章来源:丁香园
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关键词: 分子生物 流式技术 技术专题 碧迪 丁香园 丁香通   点击次数:

SELEX技术即指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)。利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度亲和的核酸配体(Aptamer)。

优点:库容量大、靶物质范围广、亲和力高、特异性强等。

应用:已成功应用于蛋白质、肽、病毒、细菌、有机物、金属离子等靶物质的筛选。

 

FACS-SELEX的步骤原理



标记荧光的寡核苷酸与靶目标孵育结合,通过流式分析最强的荧光信号,即最佳配体,用流式分选出结合靶目标的活细胞,分离出寡核苷酸,纯化分离后,再次筛选。

流式分选混合细胞的核酸配体(FACS-SELEX)

摘自:Fluorescence-activated cell sorting for aptamer SELEX with cell mixtures

Günter Mayer1, Marie-Sophie L Ahmed et al。 nature protocols | VOL.5 NO.12 | 2010 |

  

图释:使用FACSDiVa cell sorter进行核酸配体的筛选纯化。流式技术分选活细胞,排除死细胞干扰(a,本实验用钙黄绿素-AM);排除聚集体细胞的干扰(c);CD19 + Burkitt's lymphoma cells特异性适配体的富集过程(b);leukemic T-cell lymphoblasts 细胞为对照(d)。

流式技术的重要性:在于可以去除死细胞的影响;利用流式技术筛选去除死细胞后,通过10次筛选就富集到大量Burkitt's lymphoma cells特异性的Aptamer, 相反没有去除死细胞之前,筛选20次仍失败。

流式筛查富含G的寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的作用

摘自:Cancer-selective anti proliferative activity is a general property of some G-rich oligodeoxynucleotides

Enid W. Choi1, Lalitha V. Nayak Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, No. 5 1623-1635

    



图释BD FACSCalibur分析细胞摄取文库和低聚物。荧光标记的寡核苷酸孵育细胞1小时。收获细胞并使用胰蛋白酶剥离表面结合的DNA,然后通过流式细胞技术分析摄取量。摄取量的定量用黑色间隔门内细胞的百分数定量(A)HS27非恶性的成纤维细胞吸收量。 (B)A549癌细胞吸收量。 (C)DU145癌症细胞吸收量。 (D)MCF7癌症细胞吸收量。(E)表内显示每个样品的FAM-阳性细胞的百分比。

编辑: gaowei2010

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