转基因小鼠神经干细胞分离
研究背景
神经干细胞（neural stem cell,NSCs）是一类具有分裂潜能和自我更新能力的母细胞，神经干细胞不仅具有自我复制能力，还可以分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。由于神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞都可以用作特定细胞移植材料，所以如何充分利用神经干细胞多分化潜能，将神经干细胞高效的诱导分化成产生专门递质的功能神经元或特定类型的神经胶质细胞便成为研究的热点，而神经干细胞的分化与诸多基因功能密切相关。因此研究神经干细胞相关基因功能是神经干细胞定向分化的关键。在对于神经干细胞的相关研究进展里我们可以看到，无论是用于医学研究、临床治疗或者生物学研究，能够获得高纯度、高活性的神经干细胞能够对下游研究起到决定性的作用。尤其与分子生物学相交叉的研究中，例如RNA的深度测序，用于新miRNA分子的挖掘，其作用靶基因的预测和鉴定、样品间差异表达分析、miRNAs聚类和表达谱分析等科学应用。或者利用基因工程修饰体外培养的干细胞，将可以调节发育期甚至成熟神经系统的细胞因子的基因导入干细胞，达到细胞替代和基因治疗的作用。
神经干细胞由于其自身的生物学性质及表型，被列为极易受损伤的脆弱性细胞。我们使用FACSAria II对转基因小鼠进行神经干及神经元细胞的分选，得到高活性、高纯度的神经干细胞，对于下游分子水平的研究起到了至关重要的作用。流式细胞仪作为高纯度特异样本获取的方法，是细胞生物学与其他生命科学学科交叉的桥梁。
图1 BD Aria分析分选图谱，鉴定并分选出GFP阳性的神经干细
分选后显微镜下的神经干细胞 分选后显微镜下神经元细胞
实验案例
结果讨论
用BD FACSAria II成功分出GFP转基因小鼠的GFP+细胞（神经元细胞为主）和GFP-细胞（神经干细胞为主）细胞。分选收集GFP+和GFP-细胞，各2x105个，种植到60孔板中 ，贴壁培养后1小时，显微镜下计数细胞，每孔孔内细胞数量160-170个 ，分选后验证与细胞分选总数量基本没有误差，得率高。分选后细胞培养当天可见细胞贴壁生长，可观察到少量细胞分裂，活性好。
由于神经干细胞的生物学特性及其表型，在分选的过程中要保证其最大的活性才会对下游实验不造成影响。在分选条件的设置上需要选择合适的鞘液压力以及相应的喷嘴以保证神经细胞形态完整性。此外还需要注意可以通过适当的鞘液渗透压的调整来保证细胞的活性。
相关文献
简介：文章中使用Aria II分选神经干细胞以及其进一步分化产生的神经胶质和神经细胞，并通过电生理、细胞培养、脊髓植入等实验，结合Pathway高内涵成像获得的形态学数据，充分证明分选后细胞的活性和功能性。
简介：文章中介绍了来源于人胚胎干细胞的神经元经Aria分选体外培养生长良好，体外培养42天接种在大鼠脑内4周可见明显的神经细胞的生长
编辑: gaowei2010
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