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1、义翘神州可规模化供应重组蛋白
生物医学研究需要大量重组蛋白。小量重组蛋白供应无法满足科学研究需要。义翘神州为世界范围内为数不多的可规模化供应重组蛋白生物技术企业。
2、兔单抗生产≠兔杂交瘤技术
教科书上的杂交瘤技术已经不是单克隆抗体生产的唯一方法。利用分子生物学技术克隆高灵敏度抗体基因，转至真核细胞大规模表达抗体，是当今生物技术工业的重要技术。这种技术更稳定、更高产。

义翘神州的兔单抗就是这样开发、生产的。

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4种方法：不去上清也做MTT

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发布日期：2012-09-25 14:47 文章来源：丁香园
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关键词： 细胞 细胞培养 技术专题 义翘神州 丁香园 丁香通 　 点击次数：

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由于一般可离心96孔板的离心机不好找。既使是贴壁细胞做MTT时，用DMSO溶解得到结果也不好，不是得不到预期结果就是可重复性差。

解决方法1：

用以下文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良MTT方法，中国医药工业杂志，1993，24（10）：455-457

具体方法：

配三联溶解液：10%SDS，5%异丁醇，0.012mol/LHCL，蒸馏水溶解。

三联溶解液：SDS10g，异丁醇5ml，10M HCl 0.1ml用双蒸水溶解配成100ml溶液

操作：在培养板上加一定密度的细胞悬液，90ul／孔；如需给药，则再于同时(悬浮细胞)或4h后(贴壁细胞)加入不同浓度的药物10ul／孔，均设三复孔。另外，每块板上另没一个调零孔(只加培养液，不含细胞和药物)。培养2d后，加入MTT溶液20ul／孔，继续培养4h，然后加入上述三联液100ul／孔，于37度放置过夜后，用酶标仪测各孔A570值。

优点：简化操作，提高了可靠性。

解决方法2：

CCK-8试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST–8[其化学名称为：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲 染料Formazan dye）。生成的甲 物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8试剂中已预先配入了进行细胞增殖和毒性分析所需的成分，无需再用缓冲液或培养基进行稀释；同时，CCK-8试剂无需任何放射性同位素和有机溶剂。因此，无需特别的技巧，就可使每一位使用者准确、快速地得到重现性好的实验结果。

优 点：

1、简 便 只需一步即可得到结果

2、省 时 毋需预制，即开即用

3、安 全 毋需放射性同位素和有机溶剂

4、快 速 省去了溶解除沉操作

5、灵敏度高 灵敏度高于MTT

6、重现性好 步骤少；无损失；结果准确

就是比较贵，如果经费充足，用这个是不错的。

进行细胞增殖分析的使用方法:

1、接种细胞悬液100μl于96孔板内，预先置于37℃，5% CO 2饱和湿度培养箱内培养。

2、在每个孔内加入10μl的CCK-8试剂。

3、把培养板放在培养箱内培养1-4小时*。

4、在450nm波长处测定吸光度，参比波长为600nm或600nm以上。

解决方法3：使用MTS

解决方法4：

加入DMSO

在同一批实验中最好不要更换DMSO。加DMSO前把孔中液体尽量弃干净，没有去掉上清直接加DMSO，一是沉淀会很难溶解.二培养液的颜色在检测时也能被测到,会对最后结果造成影响。但前提是不能把细胞也一起吸掉，因为这样带来的误差要远远大于培养液没弃干净带来的误差,所以要在保证细胞不被吸掉的前提下，尽量把培养液吸掉。如果培养液没弃干净，空白孔也要留有等量的培养液，这样在检测时可以尽量去除培养液的影响，DMSO的量也可为100ul或150ul.

1.加了DMSO后用振荡器轻轻振荡5－10min, 时间控制尽量严格一点,放置时间长了会影响结果,值会偏大,且结果不可信.

2.加入DMSO后可用排枪反复抽吸助溶，溶解后尽快检测。如果实验孔不多，建议用此法，因其比振荡溶解效果好。

3.或放入37度放孵箱15分钟溶解结晶。

振荡是为了让甲臜溶解，这样才能更好的测量吸光度，振荡96孔板有专的振荡器，目的:扎破气泡.有气泡存在时,由于其对光的反射与折射作用(酶标仪的原理是通过测定特定波长透过样品的吸光度推测样品内特定物质的浓度),会导致结果偏移.
 

编辑: gaowei2010

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