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奇怪的“黑胶虫”

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发布日期：2012-10-08 16:50 文章来源：丁香园
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关键词： 细胞 细胞培养 技术专题 义翘神州 丁香园 丁香通 　 点击次数：


一、什么是“黑胶虫”？

“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。

“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。

目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题

关于是什么的问题的讨论

A.  玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过）

B.  据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法

C.  据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。

D.  有人说是纳米级的细菌

二、“黑胶虫”的十个特点：

（1）  与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则 多；

（2）  对抗生素无效；

（3）  可能通过培养箱空气进行污染；

（4）  单用培养液及血清培养没发现问题。

（5）  换掖冲洗后也无效。

（6）形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米，

（7） 在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。

（8） 细胞内好像也有存在，

（9） 但并不引起培养液混浊

（10） 时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡

三、如何处理“黑胶虫”？

1. 更换血清。

2. 如果是贴壁细胞，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮细胞，可以向其中少加一点滋养细胞。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。

3. 换用一次性塑料培养瓶。

4. 建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏。

5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。

6.有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。
 

编辑: gaowei2010

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