双荧光报告载体
报告基因是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因。把报告基因的编码序列和基因表达调节序列融合形成嵌合基因，或与其他目的基因融合，在调控序列控制下进行表达，通过报告基因的表达产物来标定目的基因的表达情况。
将荧光素酶报告基因载体转染到细胞中，可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术，目前广泛用于实验系统中作相关的或成比例的检测，通常一个报告基因作为内对照，使另一个报告基因的检测均一化。检测基因表达时双报告基因通常用来瞬时转染培养细胞，带有实验报告基因的载体共转染带有不同的报告基因作为对照的第二个载体。通常实验报告基因偶联到调控的启动子，研究调控基因的结构和生理基础。报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关，偶联到组成型启动子的第二个报告基因，提供转录活力的内对照，使测试不被实验条件变化所干扰。 通过这种方法，可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，比如，培养细胞的数目和活力的差别，细胞转染和裂解的效率。
生博目前已经为客户做过几百种miRNA靶点验证。具体实例如下：
一．实验目的：
验证某基因的表达受到mir-xxx的调控。并通过将预测的mir-xxx结合位点进行突变来确定该基因的的3'UTR区存在mir-xxx0的作用位点的位置。
数据及结果分析：Firefly luciferase 的数据除以Renialla luciferase 的数据，用平均值做图，如图一p 值的计算方法为双侧student-T-test。P 值判断两组数据的差异是否显著。取P=0.01。
实验结论：
根据第一组（野生型3'UTR+mir-xxx）和第三组（突变型3'UTR+mir-xxx）数据具有统计学上的显著差异，证实了mir-xxx调控该基因的表达，且结合位点为预测的位点。
同时第二组数据（野生型3'UTR+NC）和第三组数（突变型3'UTR+mir-xxx）以及第四组据（突变型3'UTR+NC）具有显著差异，说明细胞存在较高水平的内源表达的mir-xxx。
编辑: cq
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