稳定细胞株
建立稳定的细胞系，是对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，最常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin），常用G418进行选择性筛选。筛选得到的细胞可稳定表达目的蛋白，可以用于蛋白的扩增和富集，或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。传统的方法是直接转染DNA质粒后，进行药物筛选，该方法费时费力，假阳性高。目前生博公司已经淘汰了传统的直接转染DNA质粒筛选稳定株的方法，利用慢病毒可以整合到细胞基因组的特性，采用效率更高的慢病毒感染的筛选方法。
首先构建带有抗性标志的慢病毒载体，包装慢病毒颗粒。同时使用相应的药物，并对所需筛选的细胞进行药物浓度测试，选择细胞全部凋亡时药物的最低浓度。感染病毒后，在该浓度条件下进行筛选。10-14天后，挑取单克隆，扩增后通过RT-PCR检测mRNA表达情况或客户提供靶基因特异性抗体，生博提供Western Blot检测，根据蛋白表达情况，进一步筛选出稳定细胞株。生博公司目前已经构建近300多种稳定细胞株，包括带有不同荧光蛋白：GFP，RFP，LUCI等等。针对具有荧光标记而没有抗性标记的慢病毒载体，生博公司可以采用慢病毒感染，使用流式细胞仪分选的方式富集感染阳性的细胞。
编辑: cq
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