超净台里的酒精灯 有害无益？（图）

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发布日期：2012-02-20 15:04 文章来源：丁香通
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关键词： 丁香园 生物专题 义翘神州 细胞培养 超净台 　 点击次数：

我觉得不能单纯的看国外用不用酒精灯，就机械的去学习。因为国外细胞室是很干净的，洁净度很高，尘粒很少，净化台质量又好，有独立的通风系统而且细胞室内是正压，空气是只能从细胞室往外跑，而外面的空气进不来，他们污染的几率很低，用不着使用酒精灯，而国内，我们自问真正符合标准的细胞室有几个，我们的空气里的灰尘也比国外多得多，同意ryochan 的观点，酒精灯还是有很多好处的，总之，还是不要去掉酒精灯得好。

用或不用酒精灯？我们学校两种科研平台都有，一边是美式标准的实验室，禁止使用酒精灯，不用穿隔离衣‘不用带口罩帽子；一边是“正统”的无菌室，酒精灯必备还有进入前穿好隔离衣并戴好口罩帽子，强烈的反差，呵呵不过两边的细胞都养得好好得，所以个人觉得没有必要去争论这个东西，看个人习惯和具体地方情况了，反正都能养好细胞～

我们公司在美国总部的实验室都是用酒精灯的。所以，所谓的美国式实验室不用酒精灯显然是片面的。关于超净台要不要用酒精灯应该具体问题具体分析。比如说，培养的时候需要炙烤，那显然需要酒精灯。如果不需要炙烤，那点酒精灯显然就是多余了。

1、美国的细胞培养实验室一般都设在普通的屋子里，我在美国差不多呆过5、6个实验室，也见过不少其他的实验室，还没有见过细胞培养室单独特殊建造的。相反我发现国内的不少细胞培养室单独按照无尘车间的要求建造。究其原因，可能是因为国内的空气中粉尘比较多，污染的可能大些，所以对培养室的建造上反而下工夫。另外可能是因为国内无尘车间的施工便宜。在无尘车间中培养细胞，毫无疑问会减少污染的机会。但其施工成本，以及维护成本（无尘车间的过滤系统是要定时清洗和更换的，我担心不少的实验室以为造好车间就万事大吉了），还有进出的不便利，是不是值得，有待探讨。

2、就我在国外细胞培养实验室和我们公司的细胞培养实验室工作的经验，细胞培养室不需要一个异常洁净的环境。一般来说，地板如果是光滑容易清洗的（地坪漆、大理石、瓷砖均可），墙面使用不会剥落粉尘的油漆，窗户一般不要打开。这样的房间，只要定期（1-2天）拖地，就足够达到需要的洁净度了，因为真正的洁净环境是在超净台内。

3、回到要不要使用酒精灯的问题。首先在超净台内使用酒精灯的目的显然不应该是产生一个无菌的气相，因为超净台内的气相本来就是无菌的，所以使用酒精灯的目的，就是把有可能在瓶口的细菌杀死。那么只要在瓶口有合适的保护，就不需要了。我们实验室一般使用的培养液瓶在灭菌的时候，都会在盖上包上锡泊纸，使用过程中拿下，用完后又包上。所以我们是不使用酒精灯的。

在我看来，使用酒精仍然是从以前超净台技术比较差，或者是从普通场合中的无菌操作（比如普通实验室中一些分子克隆的操作）延袭而来的。在细胞培养的超净台内并不需要。有人提到美国的实验室中也有人使用酒精灯的，我的观察是在美国实验室中使用酒精灯的人往往是年纪比较大的人，或者一些照搬他们技术的人。

问题的关键在于火焰消毒的方法和原理。细菌培养中使用的接种环或接种针需要使用火焰以加热到很高的温度，在这个温度下金属的接种环/针会变红，估计在1000摄氏度左右。多数实验室是使用本生灯来完成这种火焰消毒的。然而鉴于火焰消毒的不利因素，如干扰层流设备（laminar flow hood，即超净台）中的气流，并可能引起火灾，人们设计了无需火焰的电加热设备，开关在地面通过脚踏控制，消毒完后即可关闭。而在哺乳动物细胞培养中，显然没有像接种环/针那样需要加热到很高温度的情况。多数常规的操作只是将培养瓶口或镊子在火焰上晃动一两下，难以想象这样的消毒能达到足够高的温度以杀灭微生物。并且这种“任何东西都要烧一烧"的简单思想容易造成一些塑料制品的损害，比如一次性培养瓶/皿、移液器等。

最近集中在做细胞转染的试验，养了多种细胞，污染也时有发生，在追究其原因的过程中有幸拜读了此topic，受益非浅，小弟的意见是：

1、 在开启培养瓶、皿等lids时用酒精灯烧一下主要目的肯定不是消毒灭菌，因为一时间不够长，二温度不够高，小弟认为烧一下的目的主要还是使容器口的particls黏附在局部，不至于在细胞操作过程中误入容器内；

2、国外实验室大多不用酒精灯，个人认为国外实验室的整体enviroment要比国内好的多，比如空气中尘粒少，人员走动少，入细胞培养室有固定的工作服，hood的档次和质量也很高，所以基本上可以不用酒精灯；国情不同，做事的方式也应该有所差异，个人意见在国内做试验还是保留酒精灯比较妥当！

过滤的空气是洁净的没错，但我们毕竟还要从超净工作台外向里面搬好多东西，尤其是原代培养，我不知道楼上有没有人做过原代，实验材料动物，实验器具，瓶瓶罐管的，和做饭差不多，如果试验地点环境不好，季节不好，再考虑试验动物本身这样那样的意想不到的毛病（我做海洋生物，相信各位对其脆弱易招病早有耳闻），所以，使不使用酒精灯，这根本就是因人因地因时而宜的事，如果条件够好，细胞没污染，当然可以不用。但如果条件不好，就得应用。真正的标准只有一条：细胞不污染。酒精灯只是过程和手段，不是标准。

高温对细菌具有明显的致死作用，因此最常用于消毒和灭菌。大多数无芽孢细菌经过55～60度30～60min的作用才死亡，含芽孢的细菌，对高热有极强的抵抗力，如炭疽杆菌芽孢，可耐受5～15min煮沸，肉毒梭菌芽孢则需煮沸3～5hours。干热的杀菌作用主要为脱水干燥和使大分子变性，普通细菌80～100度1hour，芽孢需160～170度2h。至少本人在临床做真菌培育试验时，上级医生总是告诫我在做完一个临床标本以后，一定要把接种针烧红才能再次接种下一个标本，以防污染！我想我们在做细胞时，仅仅将瓶口在酒精灯上晃两下，难道就可以确切达到消灭所有细菌的目的？？？老外强调在做细胞时，拿入hood里的所有物品一定要经过75％的ethanol擦洗，（国内真正有几个实验室真正做到此点），至少本人采用此方法以后污染明显降低，做原代也是这样，如果不强调无菌操作的观念，那么细菌污不污染岂不成了撞大运的事了。

我做了两年的单抗了，一直用酒精灯的做的很好的。如果不用可能也不会污染，但由于用惯了不用心里不踏实哈哈。这是我个人意见，还请高手指点。

国外的细胞室洁净度高，有优质的净化台，有独立的通风系统且细胞室内是正压等优点，可以不用酒精灯，而我们达不到这些要求，当然要用了。我们实验室也有两种要求，一种是细胞室配有固定的工作服，鞋子，禁止将外面的东西带入，不用酒精灯。另一种是可以穿自己的工作服自由进入，可以将外面的东西带入，用酒精灯。不过，培养的细胞都很好，主要是个人操作，注意防护，我们就没有带口罩，拿进去的东西要用酒精消毒的。

编辑: cq

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