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真核重组让研究更有价值
● 真核细胞本身的蛋白,尽量用真核表达,真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构,具备糖基化等修饰,更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中,研究的模式生物大都为真核生物。
● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白,折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白,一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。
● 如果你的运气足够好,发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你!如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的,药企肯定会更感兴趣,因为这样的药物候选分子商业化风险更小。
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细胞培养常见污染图片
丁香园网友布兰卡的观点为:
我个人感觉,操作之前酒精擦手消毒非常重要,因为环境再差,无菌台里一般是没问题的,但是,污染往往在这里操作时发生,因此,个人手的卫生非常重要,白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类(尽管我们有时感觉不到,但它就在你我的身边甚至身上存在着),我认为绝大多数污染是我们自己带进去的,因此,如果环境不是太差,那就找找自身的原因。
丁香园网友dsh1205的观点为:
灭菌水,是否有必要我也不太肯定。其实这一点是很容易办到的,有总比没有好。多注意一些可能的因素,对细胞总是有力的。被污染总是很麻烦的,细胞长得不好不说,还影响实验进程。
我认为有两个环节很重要,操作台及温相。我们操作前、后都要紫外杀菌30min,而且保持操作台通风设施正常。我们的温相好像从来没有用酒精擦过,更没用紫外照射。我们开温相时,先清洁剂洗手,在酒精擦手,范围与手术洗手差不多,时间一般在几秒内。另外,我自己将瓶放回相中时,还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了,吸管尽量不要深入瓶内,要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。
HepG2细胞,荧光染色检测支原体
支原体污染检测
在上面的支原体检测图片里没大片的针状点,但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体,可是要有也不应该就这么几个啊?(细胞一共培养了40小时)
丁香园网友bianmin8024认为:
这么大面积的污染,你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题,要不然就是培养基的问题。其实我觉得在每次试验前,最好简略写一下操作步骤做到心中有数。这样可以避免实验中的忙乱。既然现在已经污染了,就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水,但最起码要是蒸馏水。
以上图片细胞系念珠菌污染
处理办法:扔掉,善后办法,养成良好的无菌操作的习惯,拿70%酒精擦手,擦超净台,擦培养瓶,擦培养基瓶,各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。
编辑: helen