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抗体芯片VS western blot

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发布日期:2012-05-24 18:16 文章来源:丁香园
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抗体芯片技术与Western Blot等技术的比较(Proteomics Clinical Applications 2009)

美国NIS与NIH的研究者对于信号通路抗体芯片技术进行了探索与评价,研究者选用了HepG2细胞模型,采用胰岛素干预的方法,使用抗体芯片、Luminex悬浮芯片技术以及Western Blot的方法对干预后胰岛素信号通路的磷酸化水平进行了检测,并对结果进行了比较与评价。

研究中采用的不同技术具有以下特点:

♦    胰岛素受体信号通路抗体芯片,包括97种抗体,识别大约24种蛋白的43个磷酸化位点;

♦    悬浮芯片Luminex,包括7种抗体,其中6种识别磷酸化位点,1种为GAPDH抗体,作为内参;

♦    Western Blot,使用7种抗体,可检测4种磷酸化位点。

主要结果如下:

 

  Luminex FMB Array
  Insulin PMA PMA+Insulin Insulin PMA PMA+Insulin
Akt (Ser473) 1.21 1.17 1.07 2.03 1.37 1.24
FOXO1a (Ser256) 1.23 1.17 1.17 1.35 0.84 0.87
IRS-1 (Ser307) 0.47 1.47 1.1 0.81 2.73 1.63
p44/42 MAP Kinase (Thr202) 1.23 1.13 1.13 1.51 0.72 1.03
NFkB-p65 (Ser536) 0.48 1.5 1.08 0.42 0.92 0.96
Raf1 (Ser259) 1.67 1.11 1.21 2.09 1.18 1.48



悬浮芯片平台、Western blot检测到的位点磷酸化水平调变趋势与抗体芯片检测的结果一致,例如Akt (Ser473)、IRS-1 (Ser307) 、Raf1 (Ser259)、FOXO1a。

抗体芯片技术是一种高通量的手段,相比较于以往的手段WB,能够获得更多的信息,发现一些蛋白可能的新功能,例如这篇文献,作者发现了HSP27与PTEN可能与佛博酯引起的胰岛素抵抗有关。

编辑: helen

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