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N端测序

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发布日期:2012-06-05 17:05 文章来源:丁香园
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关键词: 生物专题 蛋白 丁香园 丁香通 欧易 oebiotech   点击次数:


原理:

蛋白质的α氨基与(PITC)在弱碱性条件下形成(PTC-)衍生物,后者在五水TFA下裂解,释放出N端(ATZ-)氨基酸,然后转化成(PTH-)氨基酸,这些衍生物用HPLC法加以鉴定。


Edman 降解示意图


仪器:

ABI 491A 蛋白测序仪
岛津 PPSQ-33A 蛋白测序仪

样品要求:

1、样品状态:可以是干粉,溶液或固定在PVDF膜上(转膜的蛋白质分子量<40kD,建议丽春红染色),注意不要使用NC膜(硝酸纤维素膜)替代。
2、样品浓度及纯度:N端测 总量>50pmol;纯度>90%;浓度>1mg/ml
3、含盐量:挥发性无机盐<20mM;不挥发性无机盐<5mM; 请务必标明样品缓冲液的成分,建议不使用Tris缓冲体系
4、请务必告知样品表观分子量范围

实例分析

某样品N端测序分析
理论N端序列:NH2NSXXECPXSH


图谱解析:根据以上图谱得到的样品的N端末端序列为:NH2NSXXECPXSH
其中X代表某一氨基酸(保密)


常见影响测试的情况:

1、样品纯度不足
2、含盐过多导致无结果,甚至损坏仪器
3、样品量太少导致无结果
4、若蛋白质出现糖基化或N端被封闭,不能用此方法进行测试;

编辑: helen

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