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双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)

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发布日期:2012-05-24 18:39 文章来源:丁香园
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关键词: 生物专题 蛋白 丁香园 丁香通 欧易 oebiotech   点击次数:


♦  双向荧光差异凝胶电泳技术简介

双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)是在传统的双向凝胶电泳基础发展出的新技术。它采用专有的荧光染料与多重样本和图象分析的方法,在同一块胶上可同时分离多个由不同荧光标记的样品,并以荧光标记的样品混合物为内标,对每个蛋白质点和每个差异都可以进行统计学可信度分析,从而具有良好的重复性和较高的准确率。另外,由于荧光染料的使用,使得双向荧光差异凝胶电泳具有高灵敏度的特性,能够满足高通量差异蛋白质组学研究分析的要求,是蛋白质组学凝胶定量的代表性技术。


DIGE流程图


♦  相对于传统的双向凝胶电泳技术的优势

    精确   可以检测到<10%的样品间差异,可信度>95%

    标准化 内标最大程度地降低偏差,得出精确的实验结论

    重复性 极佳的定量重复性和准确的量化蛋白表达数据

    高  效 多个样品在同一块胶上同时分离,减少实验时间

    简  化 易于使用,可以完全整合到蛋白质组工作流程中

    可  靠 在过去的几年中,DIGE技术已经在全世界居于领导地位的研究部门广泛使用

♦  DIGE技术可以降低的系统误差类型



♦  内标的重要性

      使不同凝胶之间的点的分析和定量更加精确

      使不同凝胶之间的匹配更加可信

      使实验间的误差与样品之间的差异区分开来


图示说明内标如何校正系统误差



分析说明:

1)在没有内标的情况下,我们通过AB两块胶的分析,会得出结论:  图中红色圆环所标

记的蛋白质点在处理组(样品3和样品4)表达量增高;

2)通过内标的校正,我们可以证明,这实际上是由凝胶之间的误差造成的,并不是样品

之间的真实差异。
 

编辑: helen

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