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Western blotting技术服务

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发布日期:2012-06-07 10:38 文章来源:丁香园
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关键词: 生物专题 蛋白 丁香园 丁香通 欧易 oebiotech   点击次数:



Western,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用。 SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,具有分辨率高、特异性和敏感性强等特点,特别适用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。

实验流程:

细胞或组织蛋白样品制备-蛋白定量-电泳(Electrophoresis)-转膜(Transfer)-封闭(Blocking)-一抗孵育(Primary antibody incubation)-二抗孵育(Secondary antibody inucubation)-蛋白检测(Detection of proteins)-膜的重复利用(Membrane recovery)-数据分析

实验要求:

客户提供一抗;

组织样本:采集新鲜组织,离体后30分钟内放入冻存管,先放入液氮中速冻数小时,后可转入-80度冰箱保存。

细胞样品:贴壁细胞:取大约1×107细胞,胰酶消化,PBS洗涤2次,放入液氮速冻,后可转入-80度冰箱保存。

悬浮细胞:离心收集细胞,PBS洗涤2次,放入液氮速冻,后可转入-80度冰箱保存。

收到标本后14-20个工作日之内提交实验结果,实验结果为整理好的电子版实验报告。


Akt在不同样本中的表达(1:2000)   beta-actin的表达(1:2000)

编辑: helen

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