丁香园 | 丁香通 | 人才 | 会议 | 药学 | 博客 　
　点击次数：次

你知道吗？ 详细 >>

1、义翘神州可规模化供应重组蛋白
生物医学研究需要大量重组蛋白。小量重组蛋白供应无法满足科学研究需要。义翘神州为世界范围内为数不多的可规模化供应重组蛋白生物技术企业。
2、兔单抗生产≠兔杂交瘤技术
教科书上的杂交瘤技术已经不是单克隆抗体生产的唯一方法。利用分子生物学技术克隆高灵敏度抗体基因，转至真核细胞大规模表达抗体，是当今生物技术工业的重要技术。这种技术更稳定、更高产。

义翘神州的兔单抗就是这样开发、生产的。

热门点评 更多 >>

MTT实验：清除上清的6种方法

转载请注明来自丁香园
发布日期：2012-09-25 15:59 文章来源：丁香园
分享到： 收藏夹 新浪微博 腾讯微博 开心网 豆瓣社区 人人网
关键词： 细胞 细胞培养 技术专题 义翘神州 丁香园 丁香通 　 点击次数：


1.加DMSO前要把液体吸掉，但培养液里的紫色结晶可能会吸去，可在这之前先用平板离心机离心96孔板，2000r，5分钟，然后吸掉上清(如果是悬浮细胞，则推荐此法,悬浮细胞要离心2500rpm×10min.且其做MTT最好用圆底型96孔板,清除上清时注意不要把下面的结晶颗粒吸掉,建议各孔吸弃150-160ul即可)。

2.我每次将MTT加入后，再孵育四个小时，然后用离心机离心1000G,5min。但是用枪小心地吸上清，还是会将一小部分蓝色结晶吸出。所以还是建议翻转倒扣的方法吧！

3.另外，可以直接将板翻转倒扣（垫几层滤纸）2－3次，比用“吸”的办法更不容易使细胞脱离出来。可以轻拍，或者倾斜一点帮助吸液，发现紫色结晶几乎没有肉眼可见的掉脱，但前提是你本身细胞贴壁要比较牢，半贴壁生长的细胞容易脱离。假如药物作用时间长的话，阴性对照组可能由于细胞过多而使加入ＭＴＴ后形成的结晶漂起来，这样就不能直接倒掉上清。

4.做MTT时，这一步骤一定要小心，不要采用倒的方式。因为贴壁不牢的细胞会被倒掉，从而影响OD值。悬浮细胞，不要翻板，离心后也不要翻板，这个方法害死人。

5.加完MTT反应3－4h后，从培养箱取出96孔板的动作要轻柔，避免振荡结晶,使其滑落.你可以试着将96孔板倾斜30度角，然后用枪尖慢慢吸，有的细胞可以用排枪一起吸，有的则要耐心的一个个用枪头吸，枪尖的力度和方向要保证每个孔都一致。不要让枪头接触到孔底，且一旦倾斜孔板后就不要反复倾斜放平，这样也会使结晶脱落。

6.用医用的注射器加上针头吸取液体的，吸取时要把板子斜放，沿着壁吸取就好了！这次MTT我用1ml针头仔细吸培养液,觉得比其它方法可靠,一般不会吸走紫色结晶.
 

编辑: gaowei2010

以下网友留言只代表网友个人观点，不代表网站观点