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1、义翘神州可规模化供应重组蛋白
生物医学研究需要大量重组蛋白。小量重组蛋白供应无法满足科学研究需要。义翘神州为世界范围内为数不多的可规模化供应重组蛋白生物技术企业。
2、兔单抗生产≠兔杂交瘤技术
教科书上的杂交瘤技术已经不是单克隆抗体生产的唯一方法。利用分子生物学技术克隆高灵敏度抗体基因,转至真核细胞大规模表达抗体,是当今生物技术工业的重要技术。这种技术更稳定、更高产。

义翘神州的兔单抗就是这样开发、生产的。

Transwell的其他应用的实验步骤

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发布日期:2012-09-25 16:23 文章来源:丁香园
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关键词: 细胞 细胞培养 技术专题 义翘神州 丁香园 丁香通   点击次数:


1. Transwell肿瘤细胞迁移实验

过程与Transwell侵袭实验基本一致,不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为,由于没有基质胶的阻挡,细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快,所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105,而迁移实验的密度是1×106。另外,下层培养液的FBS浓度也可适当下调,我做侵袭实验的浓度是5%,迁移实验的浓度是2.5%。

2. cathywxy战友的Transwell上皮细胞培养步骤

做了一段时间的原代细胞培养,把经验拿出来跟大家分享一下吧,请有关战友共同探讨:

(1). 将雄性wistar大鼠麻醉,开胸,将气管取出,置于4℃含0.1%胰蛋白酶XIV (Sigma),100 U/ml青霉素和100ug/ml链霉素(Gibco-BRL)、无Ca 2+、Mg2+,无血清的MEM。

(2). 用无菌的细胞刮棒刮气管内壁,将所得溶液离心后得到游离细胞。

(3). 离心后立即用新鲜的上述MEM溶液(含10%胎牛血清)清洗3次,以中和胰蛋白酶,再用含5%胎牛血清、100U/ml 青霉素和100 ug/ml 链霉素的LHC-8 medium (Biofluids)冲洗一次。

(4). 冲洗过后,将得到的细胞悬液用台盼兰测定活力,若存活率大于90%,则将细胞以106/cm2密度接种于可通透的多聚碳滤膜上(12 mm SNAPWELL, Costar),以37°C 5%CO2-95% 空气含5% 胎牛血清(Gibco-BRL) and 100 U/ml 青霉素and 100ug/ml 链霉素的LHC-8 medium孵育6~10天。

(5). 孵育后,经测定跨上皮电阻在1000~2000Ω之间,即可用于电生理试验。

显微镜下气管上皮细胞形细胞呈铺路石状,圆形核位于中央,生长时常彼此紧密连接成单层细胞片

链接: http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3750799_1.htm

3. metastasis战友的Transwell B16细胞的体外迁移实验

我以前用 costar的Transwell做过B16细胞的体外迁移实验,具体是这么做的:首先把Transwell倒置,在Transwell的PVPF膜(0.8 um)的下表面涂一层fibronectin(10 ug/ml,50ul),37度2小时,PBS洗一遍后,放入预先每孔加有600ul的培养基(含10%血清)的24孔板内,后在Transwell的内室加入细胞(100ul,用含0.1%血清的培养基稀释好自己所需密度),放入培养箱,12-18小时后,取出Transwell,用棉签擦去PVPF膜靠近内室那一面的细胞,另一面的细胞用甲醛室温固定30分钟,结晶紫染色20分钟,用清水洗3遍以上,后在显微镜下观察细胞,记数。

链接: http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=2681611&sty=3&keywords=Transwell

4. mci战友的内皮细胞HMEC-1迁移实验

1%明胶处理的transwell经无血清的MCDB131培液于培养箱中平衡1小时后,上室加入100?l用serum-free MCDB131稀释的5*104/孔的HMEC及不同浓度的药物,下室加入0.6ml serum-free的MCDB131培液及20%FCS刺激迁移,同时设置相应阴性及阳性对照,置于CO2培养箱中作用8小时,然后弃去孔中培液,用90%酒精常温固定30分钟,0.1%结晶紫常温染色10分钟,清水漂净,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,显微镜(Olympus, DP50, Japan).下观察并拍照,最后用10%乙酸100?l/孔抽提10分钟,于600nm处测定OD值。抑制率计算公式为:抑制率(%)=[(OD值给药组-OD值无刺激阴性对照)/(OD值不加药阳性对照- OD值无刺激阴性对照)] ×100%.

链接: http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=850667&sty=3&keywords=Transwell 

编辑: gaowei2010

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