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CCK-8试剂盒

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发布日期:2011-11-01 18:13 文章来源:上海生博
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关键词: 丁香园 生物专题 生博 CCK-8 试剂盒   点击次数:

生博细胞增殖与活性检测系列产品CCK-8与AM-BLUE 2011年夏天联手强势出击,完全取代操作复杂,耗时的MTT。为您快速大规模进行药物筛选实验节省宝贵时间。

产品介绍:

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒的主要成分为水溶性四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),WST-8在电子耦合试剂 1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的甲臜 (formazan)。 WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中,生成的甲臜量与活细胞数量成线性相关(图1)。

图1. WST-8 分子结构式及其检测原理

本试剂盒提供了一种灵敏度高、操作简便、使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT实验相比

具有明显的优势:

1.MTT实验生成的formazan不是水溶性的,需要使用DMSO等有机溶剂溶解;而本方法产生的formazan是水溶 性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

2. 本方法与MTT方法相比线性范围更宽,灵敏度更高。

3. 本方法对细胞无毒性,可以多次测定选取最佳测定时间。

4. 本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定,实验结果重复性好。

5. MTT具有毒性,同时其生成的formazan需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。

6. 本试剂盒在4℃避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。

本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物的筛选、细胞增殖的检测、细胞毒性实验以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。

本试剂盒使用方便。试剂盒包含一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,即开即用,无需其它准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解formazan,可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。

本试剂盒可以测定500个样品 (按照每个样品使用10ul计算)。

保存条件:

CCK-8溶液在避光、0-5℃的条件下可以保存1年,如长期不用可在-20℃下避光保存2年。如需经常使用请将试剂存放在0-5℃。为防止背景值增加,干扰实验结果,请勿反复冻融。

自备材料仪器:

1. 10ul、100ul、200ul等移液器

2. 酶标仪(450nm滤光片)

3. 96孔或其它规格培养板

4. CO2培养箱

使用方法:(以96孔板为例,其它规格培养板请按实际情况安排)

1. 在96孔板中接种细胞悬液 (100 ul /孔 )。将96孔板放在培养箱预培养 (在37℃,5% CO2 的条件下)。

2. 向每孔加入10ul的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O.D值的读数)。

3. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时(具体时间需要预实验测定)。

4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值,如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用600nm以及大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

5. 如果需要暂时不测定O.D值,可以向每孔中加入10ul  0.1 M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液,避光保存在室温,24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项:

1. 使用96孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可选择96孔板外围一圈不计入实验,这些孔可加入培养基、水或PBS,同时可以把96孔板置于靠近培养箱内水盘的位置以缓解蒸发。

2. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK- 8试剂后的培养时间 (参考数值:细胞增殖实验每孔 2,000 cells/100ul,细胞毒性实验每孔5,000 cells/100ul)。

3. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。

4. 加 CCK-8溶液时, 速度要快,减少残留,同时请斜贴着孔壁,不要插到培养基液面下,避免产生气泡干扰O.D.数值。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和CCK-8溶液充分混匀。

5. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待检测体系中存在还原剂,请通过预实验决定是否需要去除。

6. 加入CCK-8时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色已变化或pH值变化,建议换用新鲜的培养基。

7. 本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中,请在超净台内无菌操作,避免污染。

8. 为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或者乳胶手套操作。

有条件使用荧光酶标仪进行荧光检测的用户可以选择本公司提供的更具性价比的 Am-Blue 细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒:http://www.sbo-bio.com.cn/product01.asp?id=76

编辑: cq

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