细胞培养液讨论

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发布日期：2012-02-17 13:17 文章来源：丁香园
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关键词： 丁香园 生物专题 义翘神州 细胞培养 培养基 　 点击次数：

培养的保持

培养物是应该保持在孵箱中的。孵箱可以自动将O₂与CO₂ 混合很快达到培养基的设计要求，空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多。对于某些细胞的生长，包括神经原，应使氧含量处在一个较低的水平。可以用孵箱达到这个标准，但这样的孵箱并未广泛使用。

高湿度可避免培养皿中培养基的蒸发，保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水，这水应该经常换，乘水容器应经常消毒以防霉菌生长。若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过，那么要想完全去除污染则会非常困难。当培养物必须要长期保持在孵箱中时，应采用较少培养基的瓶、皿，且将盖子盖紧以避免蒸发，或采用相应的按比例供空气的孵箱。

温度的精确调节应定期检查，孵箱温度常设置为37℃或较低温度。细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度，但当温度升至39℃时，几小时内即死亡。

维持培养物的最佳方案常常改变。例如培养胶质细胞时，要经常换液以使其增殖达到最大。而在培养某些神经原时，则要求尽可能少的换液，神经原在两次换液之间的条件下长的最好。大脑皮质的培养要求在不换液的情形下维持一个月以上。另一方面，象海马神经原那样的细胞，倚赖于条件培养基，若换液太频繁细胞就会衰退，此时，可采用1/3或1/2换液的方式。

丁香园网友carlzeiss的观点为：

关于细胞培养液，一般的细胞系用1640、DMEM均可，我的实验室常规用两种1：1混合作为基础培养基，90%以上的细胞都可以养的很好，包括原代肿瘤细胞。需要特殊培养基的细胞，在文献里一般都会注明的。

需要注意的是，1640里的碳酸氢钠是2g，因此需要5%的CO2与之平衡，而DMEM则有3.7g碳酸氢钠，因此需要10%的CO₂平衡。1:1混合则需要7-8%。即使配液时pH不对，在CO₂ 浓度合适的孵箱内也会逐渐达到pH7.2，但是为防止在箱外操作时pH过高伤细胞，在配制时最好将培养基酸碱度调节到pH7.0左右。讲究一点的话就用通CO₂的方法调pH吧。

很多实验室不知道需要校正孵箱的CO₂浓度，一般至少每周需要校一次。有些孵箱甚至连温度也会漂移，细胞长不好很可能与温度有关的啊！

丁香园网友docxat的问题为：

通二氧化碳、加盐酸等，都要再次过滤，增加污染机会。我想偷懒。想用醋酸调，不知有何不妥之处。醋酸也可形成弱酸的缓冲体系，岂非更好？

丁香园网友midas的观点为：

在配制1640时，是把顺序稿反了－－应该使用HCl调完PH后再过滤。

丁香园网友rapidtest的问题为：

培养杂交瘤细胞大多数人用RPMI-1640或者DMEM，但我发现有人用IMDM+血清+CMC培养杂交瘤，效果非常好，是否因为IMDM营养更加丰富的原因？

丁香园网友bengbu_bli的观点为：

IMDM是专为杂交瘤细胞培养用设计的， 营养成分（高葡萄糖）和缓冲能力（真正的25mMHepes）都比RPMI1640要强得多。另外，其酚红的浓度也必1640 高出 许多。我们曾经将IMDM与1640混合配制， 用于培养T淋巴细胞的长期培养。

丁香园网友ratman的观点为：

培养基一般不要求冰冻保存，一些营养成分可能会冻融后损失掉。特别是对于含血清的完全培养基而言。1640冰冻后重溶，一些氨基酸可能不好溶，因此会造成培养基营养损失。即使是想用也要通CO₂，这样特别麻烦。因此把1640保存在4度就可以了，一般3个月问题都不大。使用前加血清就行。

丁香园网友chensy的观点为：

一般将培养液分装冰冻，一时为了减少大面积污染的可能，二是为了保存其中部分营养物质，比如：几乎所有细胞对谷氨酰胺有较高要求，而谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置－20度保存。已含有谷氨酰胺的培养液在4度冰箱中储存两周以上时，就应该补加原来量的谷氨酰胺。

丁香园网友max的问题为：

缓冲液如D-Hanks液配好后，装入盐水瓶中，如用高压蒸气灭菌，瓶口应该如何封住，有师姐说可直接将瓶塞塞住后进行灭菌，不知会不会炸？有的在瓶塞上插一个针头，针眼会引起以后保存时污染吗？是否还有别的好方法？

丁香园网友lixiner2的观点为：

我用的方法是将纱布填塞瓶口，外面在包一层牛皮纸，用绳子捆紧。消毒完毕后将牛皮纸和纱布取下，换一个已经消好毒的橡皮塞。我这样做没有引起过保存时的污染。

丁香园网友yjh的观点为：

关于细胞培养液，一般的细胞系用1640、DMEM均可，我的实验室常规用两种1：1混合作为基础培养基，90%以上的细胞都可以养的很好，包括原代肿瘤细胞。需要特殊培养基的细胞，在文献里一般都会注明的。

需要注意的是，1640里的碳酸氢钠是2g，因此需要5%的CO₂与之平衡，而DMEM则有3.7g碳酸氢钠，因此需要10%的CO₂平衡。1:1混合则需要7-8%。即使配液时pH不对，在CO₂浓度合适的孵箱内也会逐渐达到pH7.2，但是为防止在箱外操作时pH过高伤细胞，在配制时最好将培养基酸碱度调节到pH7.0左右。讲究一点的话就用通CO₂的方法调pH吧。

很多实验室不知道需要校正孵箱的CO₂浓度，一般至少每周需要校一次。有些孵箱甚至连温度也会漂移，细胞长不好很可能与温度有关的啊！

丁香园网友ljksbs的观点为：

我个人的体会，我现在正在培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，一般来说，CO₂培养箱的CO₂浓度并不一定要达到5%，3.5%-4.4%就完全可以满足细胞的生长条件了，当然加hepes起到缓冲作用，但是培养液变黄的时间长短与你培养细胞的密度有关，细胞密度越大，细胞数就越多，消耗的营养也越多，培养液PH值下降的也越快，因此，培养液变黄的时间也越短。

我认为培养瓶的瓶盖在培养箱中不要拧的太松，如果拧的太松的话，发生污染的几率可能越大。

一般来说，1640培养液可以满足大多数细胞的生长，DMEM培养液一般来说适用于培养神经细胞。

丁香园网友zhjj_003的问题为：

培养液中是否都需要加丙酮酸钠，它是什麽作用？

丁香园网友滋味的观点为：

丙酮酸钠是一种碳水化合物，是细胞生长的主要能量来源。在我们所用的培养基中一般是含有丙酮酸钠的，所以用时并不需要加。但也要视具体情况而定，如在杂交瘤技术中常用的DMEM 培养液，使用时是需要补加丙酮酸钠的。

编辑: cq

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