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真核重组让研究更有价值

● 真核细胞本身的蛋白，尽量用真核表达，真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化等修饰，更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中，研究的模式生物大都为真核生物。


● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白，折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白，一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。


● 如果你的运气足够好，发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你！如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的，药企肯定会更感兴趣，因为这样的药物候选分子商业化风险更小。

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293细胞培养技术

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发布日期：2012-02-17 15:43 文章来源：丁香通
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关键词： 丁香园 生物专题 义翘神州 细胞培养 293细胞 　 点击次数：

293细胞培养技术，供大家参考。

1、293细胞明显适应酸性环境，pH值在6.9～7.1时，可顺利贴壁生长，换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。

2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：3。

3、293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。

4、复苏　293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀，若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存，复苏时将其全部接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内，应尽量减少观察细胞次数或不作观察，以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适，如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。

其它的经验：

1、用大瓶培养较小瓶要好，可能是更有利于293均匀的分布，利于营养的摄取。

2、培养液要新鲜，每次只配1000ml，分为2-4瓶，不用的培养液，冻存在-20度。

3、要及时传代，最好是细胞基本铺满培养瓶底部，但是细胞之间还没有完全贴紧，总是多少有空隙的时候最好。

4、如果细胞贴壁不好，可能是消化过久，或是培养瓶不够干净，当然要除外细胞污染。

5、如果使用用玻璃培养瓶或皿，可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿，方法是将明胶加入培养皿，使之浸泡到底面的各个部分，然后吸出，置超净台内晾干即可使用。这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。如果是新的塑料培养瓶就不用处理。

编辑: cq

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