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真核重组让研究更有价值

● 真核细胞本身的蛋白，尽量用真核表达，真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化等修饰，更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中，研究的模式生物大都为真核生物。


● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白，折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白，一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。


● 如果你的运气足够好，发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你！如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的，药企肯定会更感兴趣，因为这样的药物候选分子商业化风险更小。

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细胞污染的一些总结和心得

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发布日期：2012-02-20 12:06 文章来源：丁香通
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关键词： 丁香园 生物专题 义翘神州 细胞培养 细胞污染 　 点击次数：

为确定有无支原体污染可做如下检酗：

①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。

②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的 Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向细胞面滴加pH5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同 围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。

④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高．但方法较为复杂

更具体的内容请点击：

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/206260

处理：（1）  加温：根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细胞放在41度作用4~5小时，最长不超过18小时，以杀灭支原体。但如此高的温度对细胞生长本身也有影响，因而在实验前先用少量细胞膜所最适合的温度和时间，以尽可能保证杀灭支原体而细胞本身又不受损伤。

（2）  动物体内接种：将受支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借体内的免疫系统杀灭支原体。待一定时间后，取出做原代培养再繁殖。

在园子里看见的一些处理方法：

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/6082993

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/7567898

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/3444771

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/1649491

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/5835136

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/3458081

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/1769351

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/4088449

七、黑胶虫问题

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/5938528

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/8690437

http://www.dxy.cn/bbs/thread/274117

http://www.dxy.cn/bbs/thread/2006186

http://www.dxy.cn/bbs/thread/128317

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/212302

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/2730543

“黑胶虫”在细胞培养中是一个令人头痛的问题，小生尽管刚开始做细胞培养，但在自己培养的细胞中也出现过“小黑点”，在高倍镜下似乎能看见其有不规则的运动，并且其生长与细胞的生长有此消彼长的关系，即当细胞状态好时小黑点会相应的减少；反之则增加，似乎有细胞竞争生长的关系，但总的来说它的出现并不影响细胞的生长。小生经过每天换液，PBS冲洗，细胞中的小黑点逐渐减少，最终消失（在之后的换液传代中，偶尔会在镜下看见个别的小黑点）。在此过程中小生也看了一些关于“黑胶虫”的资料，发现其实它是实验室中普遍存在的一个问题，国内外对“黑胶虫”并没有一个明确的定义。小生更加偏向于不存在所谓的“黑胶虫”问题。首先小黑点并不影响细胞的贴壁生长，这是与大部分微生物污染不同。其次，培养过程中出现的小黑点只是状态差的细胞发生死亡后形成的，可能是一个凋亡小体，也肯能是细胞碎片。当细胞状态好时，自然这些小黑点就会减少。第三，当颗粒的直径足够小，在液体中作不规则布朗运动也是正常的。当然这些只是小生的一些愚见，希望园子里的各位达人一起探讨，共同进步。

八、细胞交叉污染

细胞污染和细菌污染不同，细胞污染是由于在培养过程中各种细胞同时进行，而所用器具或液体混杂使用所致。这种污染没有微生物存在，但使培养细胞不同种类之间发生混乱，细胞生长特性，形态发生变化。有些变化轻微，不易察觉，有些则可能由于污染的细胞具有生长优势而最终压过原来细胞而导致细胞生长的抑制，最终死亡。污染过的细胞由于种类不纯，无法进行实验研究。

防治及处理：（1）在进行多个种类细胞培养操作时，所有器具要严格区分，最好作上标记以区分。对每一种细胞按顺序进行操作，避免一起操作时造成的混乱。（2）进行换液或传代操作时，注射器或滴管不要接触培养瓶瓶口，避免把细胞带到培养液瓶中。在进行其他细胞操作时导致细胞污染。（3）所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备，一旦怀疑发生交叉污染，可做细胞遗传学方面的鉴定，如发现原有的细胞遗传物发生改变，可以复苏早期冻存的细胞使用。

细胞污染的控制与防治相关资料：

http://www.dxy.cn/bbs/thread/3979352

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/6444894

各类细胞污染图片汇总：

http://cell.dxy.cn/bbs/topic/371083

编辑: cq

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