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真核重组让研究更有价值

● 真核细胞本身的蛋白，尽量用真核表达，真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化等修饰，更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中，研究的模式生物大都为真核生物。


● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白，折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白，一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。


● 如果你的运气足够好，发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你！如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的，药企肯定会更感兴趣，因为这样的药物候选分子商业化风险更小。

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细胞培养常见污染图片

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发布日期：2012-02-29 14:09 文章来源：丁香园
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关键词： 细胞污染 支原体 义翘神州 丁香园 生物专题 　 点击次数：

丁香园网友wangyz认为：

看到上面很多战友细胞都被霉菌污染了，而很多是由于培养箱污染的原故，我想说的是其实这种污染是很容易避免的，我养细胞近一年了，养过很多种细胞，还从来没发生过类似的情况，培养箱的水如上面有位战友所讲，加叠氮钠使其浓度到千分之零点二的（有剧毒，配置是小心勿沾到皮肤上）就可以防腐了，我们在第一使用培养箱或万一被污染的情况下通常的做法是在常规的用千分之一新洁尔灭和75%的酒精搽拭培养箱后，加入消毒过的水（普通的双蒸水高压即可，叠氮钠可先配成1%贮存浓度，用不着消毒因为微生物是不能成活的），在往培养箱中加水前放细胞室开紫外灯照20-30分钟，此时每500毫升的水加1毫升的贮存浓度叠氮钠，混匀，到入培养箱中即可。

上面的过程我想很多人是这么做的，应该没问题，至少你首次不会带入污染，我想提醒的是在每次从培养箱中取出细胞到显微镜下观察前，一定要打开细胞室的紫外灯照20-30分钟（手伸进培养箱前当然要用酒精棉球搽拭，不过一般都能做到），观察完将细胞放入培养箱前用酒精棉球搽拭细胞培养瓶后再放入。我经常看到有些人是一去细胞室先从培养箱中取出细胞观察，再做决定，如果需要处理则再开始打开细胞室的紫外等消毒。这样做是省事但极易带入细菌、霉菌等造成污染，因为你衣服上（哪怕你穿细胞室的工作服但没照过）以及细胞间的环境中就有细菌、霉菌等微生物，当打开培养时空气一流通这些微生物就有可能进入，而培养箱内的环境又极适合微生物的生长。所以我说宁可麻烦一点，但也值得！实验只要不因失误重做哪怕准备时间长一点做起来都算快的。

支原体污染

     

传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。用PBS洗洗，细胞竟然还活着。下面是20倍镜下得视野。

                                        

垂体瘤原代培养真菌污染

       

丁香园网友炉灰渣认为：

污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！但对新手来说，又满头雾水！来说说我的经验，决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！

我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）

另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！

还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！

使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

包装腺病毒所培养的293细胞出现污染，拿到医院检测中心检测证实为格兰氏阳性杆菌。经过摸排，认定罪魁祸首是转染试剂盒已遭污染。

                                     

编辑: helen

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