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- 很有帮助!
- 每种差错应该配张图
- 你好!我的也出现了70bp的引物二聚体?是正常吗?
- PCR仪热盖未拧,反应产物蒸发丢失会使各DNA相互污 ...
- PCR仪热盖未拧,反应产物丢失会使各DNA相互污染吗
- 以前做的条带很亮,相同的方法,相同的试剂,条带却很淡,找 ...
- 也遇到过,最好是找下是不是污染了
- 呵呵!!谢了哦
- 谢了哦呵呵呵
- 谢了@@呵呵
- 谢了!1呵呵呵
- 谢了呵呵呵
- 谢了!!
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- 好东西哦。
- 正好对这方面不是很了解 这个资料很有用~
- 人类就是在进步
- 学习了
- 学习了
- 第一台PCR仪有点土
- 学习了,还是不错的,虽然比较基础,比较系统的整理了
- 嗯,基本原则
- 学习了
- 用PCR仪这么久,还是头一回见着世界上第一台PCR仪 ...
条带弥散
反应成分问题:
可能的原因 | 解决办法 |
污染 | 使用阴性对照(无模板),如果阴性对照显示条带或弥散,更换所有的试剂 |
模板过量 | 1.通过电泳检查模板的浓度 2. 减少起始模板,对于低复杂度的模板(例如质粒、lambda、BAC DNA),每50ul反应使用1pg-10ng DNA;对于高复杂度的模板(例如基因组DNA),每50ul反应使用1ng-1ug DNA |
模板降解 | 1. 通过电泳检查模板完整性 2. 重新纯化模板 3. 分离新鲜的模板 |
引物浓度过高 | 降低引物浓度 |
Mg离子浓度过高 | 在1.5-4mM区间按0.2-0.25mM的间隔降低Mg离子浓度 |
聚合酶浓度太高 | 减少酶的量 |
反应条件问题:
可能的原因 | 解决办法 |
变性温度太低 | 按1℃的变化量提高变性温度 |
变性时间太短或太长 | 按5秒的变化量调节时间 |
延伸时间过长 | 按15秒的变化量缩短时间 |
循环数太多 | 减少循环数 |
编辑: cq