Small RNA深度测序
Small RNA是一类长度在20~30nt的RNA分子,主要包括miRNA、siRNA和piRNA。Small RNA能够调控基因的表达,在细胞的生长、发育、代谢等基础生物学过程中扮演着重要的角色,甚至在癌症等相关疾病形成过程中起着关键的作用。第二代高通量测序技术省去了烦琐的Small RNA克隆文库构建过程,可以一次性产生上百万条Small RNA序列,能够快速鉴定特定条件下的表达的已知Small RNA并发现新的Small RNA,同时还可以研究不同条件下Small RNA的表达差异。
技术路线
生物信息分析
1. 序列去杂(去除接头序列、简单序列等)
2. Rfam数据库以及Genbank数据库比对,去除rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA的降解片段
3. 鉴定mRNA的降解片段
4. 同miRNA数据库比对,鉴定miRNA
5. 同参考基因组比对,预测新的miRNA
6. 分析两个样品miRNA的表达差异
7. miRNA表达模式聚类分析
8. 预测miRNA靶基因
实验周期
由于合作伙伴的个性化需求不同,实验的周期也各不相同。美吉生物从获得合作伙伴样品、高通量测序到数据分析,一般控制在40到60个工作日内完成。
送样要求
1. 请提供OD260/280介于1.8~2.2之间,浓度≥750ng/μl,总量≥20μg的总RNA样品,并确保RNA无降解,无污染;或提供浓度≥20ng/μl,总量≥200ng的Small RNA样品。
2. 提取总RNA时,请避免使用过柱法和LiCL沉淀,以免Small RNA的丢失。
3. 样品保存期间切忌反复冻融。
4. 送样时使用干冰运输。
5. 质检以我方电泳胶图、紫外分析仪定量为准。
6. 请填写完整的送样订单,并提供Small RNA样品QC数据,包括电泳胶图、分光光度或Nanodrop仪器检测数据。
了解更多内容,请点击:http://www.majorbio.com/Products/SmallRNA_Sequencing
编辑: helen