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内参
内参在生物学研究中非常常见。例如RT-PCR或western blot实验中常用表达量稳定的管家基因/蛋白作为评估不同样本之间目标基因或蛋白变化的参考。以western blot为例，如果加药处理前后GAPDH或tublin、actin等基本没有变化，而目标蛋白表达变化明显，则说明“加药”过程中目标蛋白的表达受到影响。内参的引入可以排除上样量不同或样本处理过程中的偏差导致的可能误差···

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肿瘤细胞miRNA差异表达

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发布日期：2011-09-21 16:50 文章来源：欧易生物
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MicroRNAs（miRNAs）是一类进化上高度保守的单链RNA，通常长度在22nt左右。它们由基因组DNA编码，在RNA聚合酶II的作用下转录成为pri-pre-microRNA，通过一系列酶切之后形成成熟的microRNA，与RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex, RICS）结合于靶mRNA的3'-UTR区域，阻遏翻译甚至直接降解mRNA，抑制基因表达。目前，已经有超过1000种人类miRNA被发现。miRNAs影响多种病理、生理过程，例如细胞发育、分化、干细胞功能等。而且，miRNA在肿瘤发生过程当中亦发挥重要作用。不同的肿瘤 miRNA表达谱并不相同，在特定肿瘤细胞中，特定的miRNA上调或下调，进而破坏正常的细胞生命周期。miRNA参与癌细胞免疫逃逸、免于凋亡而无限增殖，肿瘤血管生成、转移等过程。肿瘤相关miRNA的变化可能应用于肿瘤分型、诊断、预后判断、指导用药，疗效监测甚至辅助治疗。

导致肿瘤细胞中miRNA表达谱改变的原因多种多样，首先是染色体的变化。多数肿瘤相关miRNA编码基因定位于染色体上癌症相关基因区域（cancer-associated genomic regions, CAGRs）,这些区域容易发生基因重排、删除、扩增、LHO等。例如，将近50%的慢性B细胞白血病患者位于13q14区的miRNA-15a和-16a基因缺失。另外，基因突变和单核苷酸多态性也可能导致miRNA表达的变化。虽然SNP很少出现在miRNA编码基因中，但一些SNP可能影响pri-pre-miRNA的转录。另外，研究显示， mRNA 3ˊ-UTR的SNP可能产生新的mRNA-miRNA结合位点，影响基因表达。

表观遗传学的改变也会影响miRNA表达，例如在淋巴瘤细胞中miR-34a启动子区甲基化高达75%，这一改变导致TS-miR miR-34a表达水平显著降低。相反，一些oncomiRs的靶mRNA为DNA 甲基转移酶、组蛋白去乙酰化酶等，可能直接导致多种基因调控区的表观改变，影响基因表达。

另一个可能导致肿瘤细胞中miRNA表达变化的因素是缺氧。缺氧是肿瘤微环境中的一个重要特征，而缺氧会影响多种miRNA的表达，例如miR-210，miR-373，miR-24a、miR-26b等。研究显示，miR-210启动子区存在缺氧反应元件，可以结合缺氧诱导因子，促进基因转录。

miRNA表达受到转录因子调控。当肿瘤细胞中相应转录因子发生变化。例如过表达、突变或缺失，则会影响下游miRNA的表达。典型的例子当属两个重要的肿瘤相关基因TP53和Myc，它们分别为重要的抑癌基因和癌基因，调控凋亡等重要的信号通路。而其中一部分作用就是控制促进凋亡的miRNA（例如miR34a，最近报道该miRNA亦靶向调控肿瘤干细胞biomarker CD44表达）或抑制凋亡的miRNA（例如miR-21，该miRNA在多种肿瘤细胞中高表达），后者通过调控相应的靶mRNA，最终促进或抑制细胞凋亡。因此，在肿瘤细胞免于凋亡，无限增值的过程中，miRNA同样作为角色之一，与肿瘤相关的转录因子共同参与其中。

另外，肿瘤细胞中miRNA的变化还可能是一些激素（例如一些妇科肿瘤中的雌激素、男科肿瘤的雄激素等）变化的结果。此外，也有报道显示miRNA表达亦存在转录后调节过程。从pri-pre-miRNA到成熟的miRNA的加工过程中，如果一些抑制因子影响Drosha或Dicer的活性，也会间接影响多种miRNA的表达。

肿瘤发生是一个多基因、多步骤的过程，越来越多的证据显示miRNA在其中的重要角色。肿瘤细胞中特征性miRNA profile对肿瘤细胞的分型、诊断、预后判断甚至治疗等意义重大。

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编辑: helen

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