抗体芯片技术与Western Blot比较
抗体芯片技术与Western Blot等技术的比较（Proteomics Clinical Applications 2009）
美国NIS与NIH的研究者对于信号通路抗体芯片技术进行了探索与评价，研究者选用了HepG2细胞模型，采用胰岛素干预的方法，使用抗体芯片、Luminex悬浮芯片技术以及Western Blot的方法对干预后胰岛素信号通路的磷酸化水平进行了检测，并对结果进行了比较与评价。
研究中采用的不同技术具有以下特点：
· 胰岛素受体信号通路抗体芯片，包括97种抗体，识别大约24种蛋白的43个磷酸化位点；
· 悬浮芯片Luminex，包括7种抗体，其中6种识别磷酸化位点，1种为GAPDH抗体，作为内参；
· Western Blot，使用7种抗体，可检测4种磷酸化位点。
主要结果如下：
| Luminex | FMB Array | |||||
| Insulin | PMA | PMA+Insulin | Insulin | PMA | PMA+Insulin | |
| Akt (Ser473) | 1.21 | 1.17 | 1.07 | 2.03 | 1.37 | 1.24 |
| FOXO1a (Ser256) | 1.23 | 1.17 | 1.17 | 1.35 | 0.84 | 0.87 |
| IRS-1 (Ser307) | 0.47 | 1.47 | 1.1 | 0.81 | 2.73 | 1.63 |
| p44/42 MAP Kinase (Thr202) | 1.23 | 1.13 | 1.13 | 1.51 | 0.72 | 1.03 |
| NFkB-p65 (Ser536) | 0.48 | 1.5 | 1.08 | 0.42 | 0.92 | 0.96 |
| Raf1 (Ser259) | 1.67 | 1.11 | 1.21 | 2.09 | 1.18 | 1.48 |
悬浮芯片平台、Western blot检测到的位点磷酸化水平调变趋势与抗体芯片检测的结果一致，例如Akt (Ser473)、IRS-1 (Ser307) 、Raf1 (Ser259)、FOXO1a。
对于本次实验获得的结果，作者总结后认为，在以往磷酸化研究中，经常使用质谱的方法，而这种方法经常会遇到富集环节等困难，而且在研究中经常用到的是对已知磷酸化位点的研究，因此抗体芯片技术是一种很好的补充，第二抗体芯片技术自身包括了磷酸化抗体与非磷酸化抗体，根据得到的结果可以直接计算出磷酸化程度，不需要使用内参；第三，抗体芯片技术是一种高通量的手段，相比较于以往的手段WB，能够获得更多的信息，发现一些蛋白可能的新功能，例如这篇文献，作者发现了HSP27与PTEN可能与佛博酯引起的胰岛素抵抗有关。
编辑: helen
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