抗体芯片在寻找药物作用靶点中的应用
抗体芯片在寻找药物作用靶点中的应用(Leukemia 2012)
CBL纯合突变在许多白血病中广泛存在，该突变降低泛素连接酶活性从而使SFK(SRC家族激酶)和RTK(受体酪氨酸激酶)活性受影响。CBL纯合突变导致的白血病预后差，需要更好的治疗方法。作者提出鉴定最重要的SFK和RTK作为分子靶点可能为寻找更有效的治疗方法提供参考。
作者首先采用SNP芯片结合测序的方法从30个细胞系中找到CBL RFD R420Q突变细胞系GDM-1 。
a：白血病细胞系中的UPD11q；b：对GDM-1的UPD11q测序发现位于RFD的R420Q突变。
c：(ARMS)-PCR结果显示GDM-1细胞系中只有CBL R420Q(163bp)而没有WT CBL(216bp)。
流式细胞仪实验，WT CBL异位表达和shRNA敲低实验进一步证实GDM-1细胞系极具CBL纯和突变的代表性(表现出高的KIT表达和GM-CSF高敏感性)，WT CBL异位表达会抑制GDM-1的增殖，但不会抑制野生型CBL细胞系THP-1。
那么，各种RTK和SFK抑制剂对这个GDM-1的抑制作用是怎样的呢？作者用7种抑制剂处理GDM-1，2个control细胞系(THP1和U937)以及CBL杂合突变细胞系(MOLM13)，发现SFK和RTK双重抑制剂Dasatinib(达沙替尼)能特意性抑制GDM-1。
那么，怎么去找出这个抑制剂特异性抑制的蛋白呢？作者用到了FMB公司的包含228个酪氨酸磷酸化位点的Tyrosine Phosphorylation proarray，检测dasatinib ( SFK和RTK双重抑制剂)或sunitinib (RTK抑制剂)处理后的GDM-1细胞裂解液。分别找到44个和56个位点蛋白磷酸化水平降低。
对其进行venn分析后即找到dasatinib特异性抑制的蛋白靶点，包括26种蛋白(29个酪氨酸位点)被Dasatinib特异性抑制，不仅包括了RTK(KIT，FGFR1，M-CSFR)，也有其他磷酸化蛋白(SRC，STAT1，STAT3，p73)。一些蛋白是与活化的KIT和GM-CSF受体下游的级联反应相关。
编辑: helen
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