shotgun 混合蛋白鉴定
原理:
针对液体或SDS-PAGE条带的复杂混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物,这些肽段混合物再通过液相色谱分离(如2DLC(阳离子柱SCX和C18反相柱串联)或1DLC 的C18反相柱),再用串联质谱测试,然后在相应的数据库检索进行鉴定,可同时鉴定成百上千种蛋白质。
优点:
与传统的2D-gel比,一般的说来,Shotgun方法的灵敏度要高
缺点:
会丢失一部分翻译后修饰的信息
样品要求
1. 样品量>300μg,浓度>0.5mg/ml
2. 含盐量<50 mM
3. 注明样品制备的过程及所用的裂解液成分
4. 注明样品的组成成分(是否含脂类、色素、糖等)
5. 注明是否可以用沉淀、透析以及超滤等来除盐及杂质
编辑: helen