分子量测定
原理:
蛋白质分子离子化后,通过质量分析器对其质荷比进行分析,或进一步通过算法得到样品的精确分子量。
仪器一:基质辅助激光解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF)
特点:
可分析分子量较大的分子
对杂质的忍耐性较好
适用于混合物的分子量测试
精度高(分子量<5000Da,精度<200ppm;分子量>5000,误差约千分之一)
仪器二:液相色谱-电喷雾质谱(ESI-MS)
特点:
准确度高
一般用于分子量较小的蛋白质分子量测试
样品要求:
含盐量:挥发性无机盐<20mM;不挥发性无机盐<5mM
样品蛋白质总含量>50pmol;纯度>90%
样品应尽量保持其纯度,不要添加任何保护剂或其他物质
实例分析:
大分子量样品的分子量测试分析:
样品理论分子量:67680Da
图谱解析:根据图谱得到的分子量为67695.3893Da
常见影响测试的情况:
1. 含盐或其他杂质的量过高。
2. 蛋白质纯度不足。
3. 蛋白质本身特性(如糖基化)造成难以离子化,测试无结果。
4. 分子量超出测量范围(太大或太小)。
5. 有杂蛋白污染。
6. 原蛋白质发生了降解。
7. 样品量太少
编辑: helen