真核重组让研究更有价值

● 真核细胞本身的蛋白，尽量用真核表达，真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化等修饰，更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中，研究的模式生物大都为真核生物。

● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白，折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白，一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。

● 如果你的运气足够好，发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你！如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的，药企肯定会更感兴趣，因为这样的药物候选分子商业化风险更小。

细胞培养技术扫盲

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发布日期：2012-03-05 18:33 文章来源：丁香园
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关键词：细胞培养

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十三、染色体制备体会

1、培养基PH浓度、小牛血清量及培养箱温度的恒定是培养成功关键；

2、秋水仙素适量、适宜的处理时机和时间，是获得良好、足够分裂相的条件。分裂相的多少和染色体形态及带型处理良好与否均受其影响。

3、低渗处理是获得分散良好的分裂相关键步骤，低渗过度或不足都会造成染色体形态不良的结果。在低渗处理时期细胞十分娇嫩，并且表面发粘，低渗细胞混匀时，吹打要适宜，避免细胞破碎及粘团，另外不要将细胞吸到吸管上部及离心管上部，避免细胞丢失。

4、固定技术是制备良好分散的染色体的重要步骤。若染色体分数不良，可适当加大冰乙酸含量，其同时有改善由于低渗处理不够或固定不充分所造成的缺陷，但过量会造成染色体形态变化和影响分带结局。染色体形态不良与固定液速度有关，加第1次固定液过快或打过快，可造成飘带样染色体；

5、固定液每次使用必须新鲜配制，否则将会形成酯类，从而影响固定效果。

6、滴片是染色体制备中影响染色体形态的关键一步。首先要载玻片要非常干净，否则会影响染色体的分散和分带效果。其次是滴片的距离、滴加量多少、制片的方式都会影响染色体分期效果。

7、烤片：是染色体制备中最后一步技术。烤片的温度、时间与染色体形态和分带有关。不宜温度过高和烤片时间过长。

十四、染色体实验技术分析

染色体分裂指数低：患者处于非常时期（感染期、放、化疗期）；培养基营养成份不良；培养基PH偏低或偏高；PHA过量或不足；小牛血清质量不高；小牛血清数量偏低或过高；培养温度不稳定；培养箱温度偏低；秋水仙素处理时间过短；离心时间或速度不足；制备过程损失过大。

染色体形态不理想：受检者处于非常时期；PHA过量；小牛血清质量不高；培养箱温度不恒温；秋水仙素量不当；低渗时间不理想；低渗温度过高；离心速度过高；固定液加速过快；固定混匀手法过重；吹片技术不良。

染色体形态偏长：培养基PH偏酸；秋水仙素量偏低；秋水仙素处理时间偏短；

染色体形态偏短：培养基PH偏碱；秋水仙纱处理量过量；秋水仙素处理时间过长。

染色体分带不良：血液状况不良；培养基营养成分不良；小牛血清质量不高；小牛血清数量不当；培养箱培养温度不良；秋水仙素处理量过高；PHA量过高；低渗处理时间或温度不良；胰酶质量不良；染色液质量不良；染色技术不良；分带技术不佳。

染色背景不良：培养细胞生长不良；低渗处理技术不良；离心过程尘染；分带技术不良；染色技术不良；染色液尘染；载玻片处理不干净；制片过程尘染；存片环境不干净。

培养失败：培养中损失；血源质量不良；培养中感染；小牛血清污染；培养箱温度失控；PHA过期或过量；秋水仙素失效；低渗失败；离心机失误。

标本损失：培养中损失；制备中损失；分带中损失；保存中损失。

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编辑: helen

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