丁香园 | 丁香通 | 人才 | 会议 | 药学 | 博客 　
　点击次数：次

PCR技术介绍 更多 >>

热门点评 更多 >>

DNA聚合酶

转载请注明来自丁香园
发布日期：2011-11-28 17:47 文章来源：杭州朗基
分享到： 收藏夹 新浪微博 腾讯微博 开心网 豆瓣社区 人人网
关键词： 丁香园 生物专题 杭州朗基 DNA聚合酶 　 点击次数：

Vent (Thermococcus litoralis)

Vent聚合酶有3'-5'外切酶较读功能，因此比Taq等聚合酶有相对高的可信性。注意，当延伸的长度大于2kb时，往往要使用超过2mM的Mg离子浓度。而当延伸长度小于2kb时，长度和Mg离子水平间不存在相关性。当模板链上存在次黄苷酸或脱氧尿苷时，阻止聚合酶的延伸。

建议使用的PCR试剂和已知的特性：
      dNTPs:   200µM - 400 µM
      Mg2+:  1.5 mM - 7.5 mM
      盐:  10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4
      pH:  8.5
      缓冲液:  20 mM Tris-HCl, pH 8.8
      添加剂:   Triton X-100
      错误率:
      2.4 x 10-5 errors/bp (Cariello et al., 1991)
      4.5 x 10-5 errors/bp (Ling et al., 1991)
      5.7 x 10-5 errors/bp (Matilla et al., 1991)
      效率/循环:   70%

Deep Vent (Pyrococcus species GB-D)

Deep Vent酶对高温和低温都具有极端的稳定性，并耐受多种潜溶剂，例如甲酰胺和DMSO。能产生长的延伸链，最长达到14kb。Deep Vent比Vent的外切酶活性高四倍，比Taq的活性高5-15倍。注意延伸超过2kb的链时，需要的Mg离子浓度一般要超过2mM。而当延伸长度小于2kb时，长度和Mg离子水平间不存在相关性。当模板链上存在次黄苷酸或脱氧尿苷时，阻止聚合酶的延伸。

建议使用的PCR试剂和已知的特性：
      Mg2+:  2 mM - 6 mM
      盐:  10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4
      缓冲液:  20 mM Tris-HCl, pH 8.8
      添加剂:   Triton X-100

错误率:
      New England Biolabs公司表明大约是Vent酶的两倍 (2.4 - 5.7 x 10-5 错误/bp)

UlTma  (Thermotoga maritima)

UlTma是一种高保真的DNA聚合酶，当模板长度<=3kb时，可提高高的产物产率。产生平末端的PCR产物。

建议使用的PCR试剂和已知的特性：
      dNTPs:   40µM
      Mg++:  1.5 - 2.0 mM
      盐:  10 - 35 mM KCl
pH:  8.3 - 9.2
      缓冲液:  10 mM Tris-HCl, pH 8.8
      添加剂:   Tween 20
      延伸:  72° C - 80° C

编辑: cq

以下网友留言只代表网友个人观点，不代表网站观点