培养基手册

转载请注明来自丁香园
发布日期：2012-02-17 14:05 文章来源：丁香园
分享到： 收藏夹 新浪微博 腾讯微博 开心网 豆瓣社区 人人网
关键词： 丁香园 生物专题 义翘神州 细胞培养 培养基 　 点击次数：

4、综合成本降低

综上所述，动物细胞培养技术是生物制品产业化的核心技术之一，在生产中，应该系统、全面的研究细胞培养技术对生物制品成本的综合影响，不断追求最佳的细胞培养技术，提高生产效率，有效降低生物制品成本，提高利润率，增强产品市场竞争力。

五、细胞生存条件

1、基本营养物质

（1）糖

六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。

（2）氨基酸

维持生存需12种氨基酸（精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬）。谷氨酰胺需量最大,缺乏时细胞生长不良。

单细胞培养或细胞量少时,所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。

（3）维生素

细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。

2、促生长因子、激素类物质

3、其它物质

基本元素、微量元素、促细胞贴附物质(纤粘连蛋白、层粘连蛋白laminin、IV型胶原、氨基多糖类)

4、水

主要成分和生存环境,要求高纯度水。

5、温度

哺乳动物及人源细胞最适培养温度为35℃—37℃,对低温耐受力比高温强。39℃以上受损→死亡；不低于0℃时（0℃-34℃），细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。

6、气体环境和pH

需O₂ 、CO₂，通氧量过大对细胞有毒害。

CO₂ 主要与维持pH有关，细胞培养最佳pH为7.2—7.4，通过缓冲系统和调节CO2含量，维持正常pH。

开放培养要求5%CO₂环境、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml可防止pH变化。

含Earle’s缓冲系统的培养基适合于5％CO₂的培养条件，Hanks’缓冲系统的培养基仅含有0.35g/L NaHCO₃，不能用于5％CO₂ 的环境，若放入CO₂ 培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。

7、湿度和光

开放培养相对湿度控制在95%。细胞培养需避光，紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。

8、影响细胞生长的其它因素

接触橡胶用品、收集细胞时离心速度过大、细胞接种浓度过低等。

六、细胞培养基的基本要求

1、营养成分

氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。

2、促生长因子及激素

3、渗透压

4、pH

5、无毒、无污染

七、细胞培养基组成及作用

1、氨基酸

组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

必需氨基酸包括L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸等。

2、维生素

维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源， 但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。

脂溶性维生素如：A、D、E、K。

水溶性维生素如：B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸、生物素、C、烟酰胺等。

许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分，没有它们，酶便没有活性，代谢活动将无法进行。

VA是细胞合成糖蛋白时寡糖基的载体，对上皮细胞有重要的维护作用。VD参与调节钙的吸收。VE是抗氧剂，可防止组成生物膜的磷脂中不饱和脂肪酸被氧化。VK缺乏会引起低凝血酶原及凝血时间延长。

叶酸是合成四氢叶酸的重要原料，四氢叶酸在核酸的生物合成和蛋白质的生物合成过程中起重要作用。

生物素是一些特异羧化酶的组成部分，参与糖代谢和脂肪酸的合成过程。

3、碳水化合物

碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。

4、无机离子

钠、钾、镁、钙、磷等基本的无机离子，这些都是细胞组成所必须并参与细胞的代谢。

培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg −320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。

Na⁺ 是细胞外液中最主要的阳离子，对维持渗透压的恒定有决定性的作用。K⁺主要分布在细胞内液，细胞内K⁺ 的对于激活某些酶是必需的，它在调节细胞内环境的酸碱平衡也有极重要意义。 Ca²⁺ 在细胞外液中的作用是将组织内部细胞之间相互粘着，在细胞内参与许多重要的细胞生理活动，如传导、参与肌肉细胞收缩等。 Mg²⁺  是构成细胞间质的重要成分，对于细胞间相互稳定结合有很重要的意义。磷的化合物对细胞物质代谢和生理功能调控的功用是十分广泛而不可缺少。

八、细胞培养基发展趋势

1、无血清培养基

是设计用来在无血清条件下促使特殊类型的细胞生长或进行专门应用的培养基。需要添加生长因子和/或细胞因子，含有个别蛋白或大量蛋白组分。其主要优点：

增加确定性；

性能更一致；

容易进行纯化和下游加工；

提高制品安全性和/或产量。

2、无蛋白培养基

培养基中没有添加蛋白，但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分（如低分子量肽的各种水解物）。

3、化学限定培养基

培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均有已知的化学结构。

九、培养基的品质

1、外观

颜色、粉末细度须均匀。

2、溶解性

培养基完全溶解，可以避免培养基内营养成分的流失。

3、H值

哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，同时pH值的测定也可以检查培养基的批间差异。

4、水分

培养基的营养成份很丰富，利于微生物的滋长，因此水分的含量控制可以延长有效期。

5、冰点渗透压

细胞必须生活在合适的渗透压环境中；同时渗透压值的测定也可以检查培养基的批间差异。

编辑: cq

以下网友留言只代表网友个人观点，不代表网站观点

昵称：游客 请登录或注册后，发表留言

验证码：