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真核重组让研究更有价值
● 真核细胞本身的蛋白,尽量用真核表达,真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构,具备糖基化等修饰,更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中,研究的模式生物大都为真核生物。
● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白,折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白,一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。
● 如果你的运气足够好,发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你!如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的,药企肯定会更感兴趣,因为这样的药物候选分子商业化风险更小。
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培养基手册
(2)低血清培养基的优点
小牛血清是细胞培养液成本最大的原料,使用低血清培养基明显地节省培养液成本。
减少制品纯化损失,提高纯化收率,便于分离纯化。
减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险。
提高制品安全性。
批间差减少或影响降低:
a)血清用量减少可以减少使用批次。
b)血清用量减少使得批间差的影响减少。
细胞在低血清培养基的生长相当或者优于加入10%小牛血清的传统培养基,没有观察到在细胞形态及增殖方面的显著差异。
(3)低血清细胞培养基的应用
VERO细胞、BHK21细胞等细胞在转瓶、微载体反应器中的培养。
5、无血清无动物组分细胞培养基
无血清无动物组分细胞培养基意指以该培养基配制的培养液无须添加牛血清即可培养细胞和维持生长收液,且该培养基成分中不含有任何动物来源成分。
在细胞培养生产生物制品过程中无须添加动物来源成分,避免疯牛病、口蹄疫等传播进入人体,减少人、兽在使用生物制品时的特异性免疫反应、降低产品成本(如降低培养液成本,简化下游纯化工作及提高产品收获量等)。采用生物反应器、无血清无动物来源成分培养基进行细胞培养制药是21世纪生物制药发展趋势;美国FDA和美国农业部已经严格控制在细胞培养中胎牛血清的使用。
同时,高密度细胞培养并长时间维持细胞密度是高表达率和高产量的关键,只能通过无血清悬浮培养技术来实现。
为了获得足够的营养成分,无血清无动物组分细胞培养基中氨基酸含量倍增,另外添加了生长因子和/或细胞因子,以及含有个别蛋白或大量蛋白的组分。
无血清无动物组分细胞培养基通常是特定细胞专用培养基,如无血清无动物组分CHO悬浮细胞培养基适用于CHO悬浮细胞。
6、替代天然培养基
培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分,所有的成分均有已知的化学结构。
(三)细菌培养基
细菌培养基为肺炎、流脑等细菌培养疫苗生产专用培养基。用于细菌性疫苗大规模生产中细菌体的培养及实验室中细菌体的研究培养。
目前细菌性疫苗生产厂家及实验室都使用自行配制的培养基进行细菌体的繁殖培养,由于配制工艺的不同、各种培养基组分来源不同,以及培养基中重要活性添加剂来源的质量不稳定性,导致了细菌体繁殖培养的数量和质量不稳定,批间差较大,结果时好时坏,该结果不仅给培养基使用者增加了成本,还严重影响了疫苗生产厂家的产量和质量,延误科研进程。
编辑: cq