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真核重组让研究更有价值

● 真核细胞本身的蛋白，尽量用真核表达，真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化等修饰，更可能具有天然功能。而目前生命科学研究中，研究的模式生物大都为真核生物。


● 在真核细胞表达真核细胞的蛋白，折叠、修饰等方面更接近于天然蛋白，一般内毒素更低。这样试验过程才更接近真实的细胞活动。


● 如果你的运气足够好，发现你的实验结果可以为药物开发提供线索。恭喜你！如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的，药企肯定会更感兴趣，因为这样的药物候选分子商业化风险更小。

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细胞培养中霉菌污染问题

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发布日期：2012-02-20 12:56 文章来源：丁香通
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关键词： 丁香园 生物专题 义翘神州 细胞培养 细胞污染 　 点击次数：

fairyland：最近培养筛选细胞频频污染，以前操作还没有现在认真，细胞一样长势旺盛，一点问题也没有。现在越是小心谨慎，却总是污染，即使第一二天没有污染，时间稍长就出现了。其它同学有时有，但我出现的次数最多。一种是一小团一小团褐色成致密网状，一种是如同芽孢状，一串一串的。细胞筛不出来后面的试验根本就无法进行，真是心急如焚，大家帮帮忙吧！

gsy1234：严格保证泡酸，消毒过程！，换血清和重新配培养基！我有过类似经历！这样处理后就没出过问题！舍不得孩子套不住狼！麻烦一点，总比浪费时间和金钱重要！

weric：你的问题很严重, 且强烈怀疑有fungi 污染(是如同芽孢状，一串一串的), 所以根本解决之道, 先把 CO2 incubater 以酒精和抗 fungi 药物擦拭, 铁盘拿去灭菌. 然后所有 mdium PBS 重新配制, 最后重新解冻新细胞来培养

zhizuchangle：最好来一次彻底清洗，包括培养箱水盘和无菌室，所养的细胞全部高压后弃去，水盘别忘了加点硫酸酮，可以防霉菌。若是怀疑培养液污染，可以在每次配液时先装一小瓶观察，直到确定无污染再使用！

ssmu_fruit：不必太紧张,这种经历养细胞者一般都会有。瓶口不要太松(防止孢子飘入),放入培箱前瓶口烧一烧,瓶身用酒精棉擦拭一下。培基等过滤过的液体不必扔掉(0.22um),没有问题。培箱开启前大家都用酒精消毒手,避免不必要的污染。要保证冻存的细胞未经污染.

紫水晶：我最近养CHO-HUK细胞，这一个月来总是污染，有时是细密的东西，像是细菌；有时是霉菌，刚过滤的2000ml培养基都污染了，可以明显看到白色的菌落生长；再就是我的胎牛血清过期了一个月，发现里边有许多漂浮的异物，在镜下看是许多弯曲的东西，在孵箱里培养一天便混浊，应该也是细菌污染。我想请问：血清过期和污染有没有必然的联系？在这样潮湿闷热的天气里应该怎样预防和控制污染，大家有什么好办法？

little_G：可能的原因：

1、天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。

2、培养间里可能暗藏污染原。

3、注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我遇到过）

4、培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。

5、血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，个人体会觉得其联系不大。

解决办法：

1、彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。

2、彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。

3、实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。

4、一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。

5、如果用双抗，应该现用现配。

6、注意过滤器的消毒灭菌。

7、过期的血清，可以做培养检查是否被污染。如有怀疑，建议不用。

8、检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。

总之，潮湿闷热天气培养细胞非常容易污染，必须注意每一个环节。具体的可能造成污染的环节，还得要自己体会查找。

hdfi8d：

1、用碘伏仔细擦洗浮箱和操作台，地面，然后用紫外灯照1小时

2、处理完细胞放回浮箱是用酒精棉擦培养瓶的底部

happywind：我的一瓶价钱不是很贵的血清，用后总是发现培养基中有很细小的类似细菌污染的东西，但是培养液又不很快变浑，不像细菌污染，细胞长的也慢，现在想想也许就是血清的问题吧，养细胞血清的选择还是很重要。

避免污染，我认为：

1、每次做完实验，超净台要用酒精喷擦；打开紫外线照射；

2、严格无菌操作；

3、孵箱定期清洗，换水；

4、每次观察细胞后，酒精喷瓶口；

5、培养瓶最好放在一个托盘上，然后在放入孵箱。托盘是高压蒸汽消毒过的。

limengqiang：防止细胞污染很简单，只要按照外科手术的操作原则进行无菌才操作，保证污染不了。

olivezrp：还有 一个 问题，就是血清用之前是否灭活过。很多公司的血清 ，分装 之前 需要灭活，不是一定要灭活 的，但如果 你 没有 灭活，即使没有污染，镜下也 可见 许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等，建议血清分装前，56度水浴 灭活30分钟。

guanping：倒置显微镜一般是看不到"许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等"的,关于血清污染:买回来后(进口的一般不需要灭活),溶解后分装一小瓶,培养箱里72 h 以上,即可看到污染与否(没有污染的应该是透明度很好的).如果有问题,就退货,没有话说.如果发现溶解后即可看到明显的漂浮生物,呢就不用我说了。使用过程中,最好分成小瓶,用个1 周左右,4 度保存!反复冻融,对其效果和性状有影响.

brisk2004 ：我最近也碰到了这样的问题，养的815细胞总是污染，把培养基，胰酶等什么都丢了也不行，后来我发现培养箱里面长霉了，清洗灭菌之后才没事了。

编辑: cq

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